造血干细胞流式指标（造血干细胞流式检测方案）
- 作者: 胡璟浩
- 来源: 投稿
- 2024-12-11
1、造血干细胞流式指标
造血干细胞流式指标
流式细胞术用于表征和分离造血干细胞 (HSC)，基于以下指标：
细胞表面标记物
CD34: 原始和祖细胞标记物
CD38: 成熟细胞标记物
CD45: 所有白细胞标记物
CD45RA: 原始 HSC 标记物
CD90: 间充质干细胞标记物
CD105: 间充质干细胞标记物
CD117: cKit 受体，HSC 标记物
CD133: 原始细胞标记物
HLADR: MHC II 受体，激活细胞标记物
细胞内标记物
Ki67: 增殖细胞标记物
HOECHST 33342: DNA 结合染料，用于区分有丝分裂期的细胞
PYRONIN Y: RNA 结合染料，用于区分细胞质丰富的细胞
功能性指标
侧向散射 (SSC): 细胞大小和粒度
前向散射 (FSC): 细胞复杂性
微粒 (SSCA): 胞浆颗粒性
造血干细胞的典型流式表型
CD34+CD38CD45RA+CD45dimCD90+CD117+
CD34+CD38CD45RA+CD45dimCD133+
CD34+CD38CD45RA+CD45dimHLADR
注释：标记物表达可能因造血干细胞亚群而异。
流式指标的选择取决于研究或临床应用的具体目标。
联合使用多种标记物可以提高造血干细胞的分离和表征特异性。
2、造血干细胞流式检测方案
造血干细胞流式检测方案
目的：分离和表征造血干细胞（HSCs）和造血祖细胞（HPCs）群。
材料：含有抗体的流式细胞仪
预处理缓冲液
抗体混合物
同工型对照抗体
鞘液方法：
1. 样本制备：
从骨髓、外周血或脐带血中分离单核细胞。
洗涤并重悬细胞于预处理缓冲液中。
2. 抗体染色：
将抗体混合物添加到细胞悬液中。抗体混合物应包括标记 HSCs 和 HPCs 特异性表面抗原的抗体，例如：
CD34
CD38
CD90
CD133
CD45RA
CD123
3. 孵育：
将细胞在 4°C 下孵育 30 分钟，避光。
4. 洗涤：
洗涤细胞并重悬于鞘液中。
5. 数据采集：
使用流式细胞仪采集细胞数据。
采集侧向散射 (SSC) 和前向散射 (FSC) 数据，以区分不同大小和粒度的细胞。
采集荧光数据，以识别标记不同表面抗原的细胞。
6. 数据分析：
使用流式细胞分析软件对数据进行分析。
使用同工型对照抗体设置门，以排除非特异性结合。
识别和表征 HSCs 和 HPCs 群，基于其表面抗原表达谱。
提示：优化抗体滴定，以获得最佳信噪比。
使用新鲜样本或冷冻保存的样本。
使用适当的对照，例如未标记的细胞或只标记同工型对照抗体的细胞。
标准化数据采集参数，以实现样品之间的可比性。
3、造血干细胞看哪个指标
血常规指标：
白细胞总数
中性粒细胞百分比
淋巴细胞百分比
血小板计数
血红蛋白水平
骨髓象指标：
骨髓细胞总数
有核细胞总数
造血干细胞（CD34+细胞）百分比
粒－单核细胞（CFUGM）计数
巨核/血小板系前体（CFUGM）计数
其他指标：
流式细胞术（FCM）：可检测造血干细胞的表面标志物，如CD34、CD38和HLADR。
聚合酶链反应（PCR）：可检测造血干细胞特异性基因的表达，如Oct4和Nanog。
体外培养试验：可评估造血干细胞产生各种血细胞的能力。
4、造血干细胞流式检测
造血干细胞流式检测
定义：造血干细胞流式检测是一种通过流式细胞仪对造血干细胞（HSC）进行定量和表征的技术。
原理：流式细胞仪利用激光束照射细胞，并检测细胞的散射和荧光信号。基于这些信号，可以对细胞进行分类和计数。
方法：1. 样品制备：从骨髓或外周血中采集单核细胞。
2. 标记：使用荧光抗体对 HSCs 的特定表面标志物进行标记，例如 CD34、CD38、CD90 和 CD133。
3. 流式细胞仪分析：标记的样品通过流式细胞仪，激光束照射细胞，测量散射和荧光信号。
4. 数据分析：使用流式细胞仪软件对数据进行分析，根据表面标志物表达对 HSCs 进行分类和计数。
用途：HSC 研究：研究 HSC 的分布、表型和功能。
造血干细胞移植：评估供体和受体的 HSCs 质量和数量。
血液系统疾病诊断：检测血液系统疾病，如白血病和再生障碍性贫血中 HSC 的异常。
再生医学：监测 HSCs 在干细胞移植和组织工程中的增殖和分化。
优点：快速准确
可以同时检测多个标志物
提供细胞表型和功能的详细信息
局限性：受抗体特异性和标记效率的影响
昂贵，需要专门的设备和训练有素的操作员
只能分析表面表达的标志物
