肿瘤干细胞功能实验（极限稀释实验 肿瘤干细胞）
- 作者: 李皙颜
- 来源: 投稿
- 2025-01-14
1、肿瘤干细胞功能实验
肿瘤干细胞功能实验
目的：表征肿瘤干细胞的特性
研究肿瘤干细胞对治疗的抵抗性
开发针对肿瘤干细胞的治疗策略
方法：1. 肿瘤干细胞分离：
利用表面标记物、膜泵或侧群细胞分选等技术从肿瘤组织或细胞株中分离肿瘤干细胞。
2. 肿瘤形成试验：
将分离出的肿瘤干细胞接种到免疫缺陷小鼠中，观察其形成肿瘤的能力。
3. 自我更新试验：
体外培养肿瘤干细胞，并检测其自我更新形成悬浮球的能力。
4. 分化潜能试验：
体外诱导肿瘤干细胞分化成不同的细胞谱系，并分析其多能性。
5. 药物敏感性试验：
用靶向肿瘤干细胞信号通路或机制的药物处理肿瘤干细胞，并评估其敏感性。
6. 迁移和侵袭试验：
检测肿瘤干细胞迁移和侵袭基质的能力，以研究它们扩散和转移的潜力。
7. 免疫原性试验：
分析肿瘤干细胞的免疫原性，包括 MHCI 和 MHCII 表达以及对免疫细胞的应答。
8. 机制研究：
利用 RNA 测序、ChIPSeq 和 CRISPRCas9 等技术研究肿瘤干细胞维持其特性的分子机制。
应用：了解肿瘤干细胞的生物学特性
确定肿瘤干细胞对治疗的抵抗性机制
开发靶向肿瘤干细胞的治疗方法
改善癌症治疗的预后
2、极限稀释实验 肿瘤干细胞
极限稀释实验
极限稀释实验是一种技术，用于评估细胞群体中形成克隆的能力。该实验涉及将细胞稀释成非常低的浓度，以便每个孔中只有一小部分细胞。然后培养细胞一段时间，观察有多少孔形成了克隆。
肿瘤干细胞
肿瘤干细胞是肿瘤中的一小部分细胞，具有自我更新和分化能力。它们被认为是肿瘤耐药和复发的根源。
极限稀释实验与肿瘤干细胞
极限稀释实验已用于评估肿瘤干细胞的频率。通过将肿瘤细胞稀释成非常低的浓度，研究人员可以确定形成克隆所需的细胞数量。此信息可用于估算肿瘤干细胞在肿瘤细胞群体中的频率。
实验过程极限稀释实验的典型过程包括以下步骤：
1. 肿瘤细胞培养：从肿瘤中分离肿瘤细胞并将其培养在培养基中。
2. 稀释：将细胞悬浮液稀释成一系列浓度，从非常低到非常高。
3. 接种：将不同浓度的细胞接种到培养板或培养皿中，每个孔中只有一个细胞。
4. 培养：培养细胞一段时间，通常为 13 周。
5. 计数克隆：观察培养板并计数形成可见克隆的孔数。
数据分析极限稀释实验的数据可用于计算肿瘤干细胞频率。一种方法是使用 Poisson 分布。该分布描述了随机事件发生在固定时间或空间间隔内的概率。
在极限稀释实验中，Poisson 分布可用于估计孔中形成克隆所需的细胞数量。通过将观测到的克隆数与 Poisson 分布进行比较，可以推导出肿瘤干细胞的频率。
应用极限稀释实验已用于研究肿瘤干细胞在各种恶性肿瘤中的作用。该实验有助于了解肿瘤干细胞在肿瘤发生、耐药和复发中的作用。它还可用于开发靶向肿瘤干细胞的治疗方法。
3、肿瘤干细胞成球实验
肿瘤干细胞成球实验
原理：肿瘤干细胞 (CSC) 是具有自我更新、分化和肿瘤发生潜能的细胞。成球实验是一种体外检测 CSC 的方法，它依赖于 CSC 在培养条件下形成圆形细胞簇（成球）的能力。
实验步骤：
1. 细胞采集：从肿瘤组织或细胞株中分离肿瘤细胞。
2. 细胞悬液制备：将细胞悬浮在培养基中，并去除红细胞。
3. 稀释和扩增：将细胞稀释到低密度，使其形成单个细胞的培养物。这些细胞随后在适当的培养条件下扩增。
4. 成球形成：细胞在无血清或低血清培养基中培养一段时间，允许成球形成。
5. 计数成球：培养结束时，计数培养物中的成球。
6. 成球体积测量：可以使用显微镜或图像分析软件测量成球体积。
数据分析：
成球频率：成球数量除以接种细胞数量。
平均成球体积：所有成球体积的平均值。
应用：识别和表征 CSC
研究 CSC 的自我更新和分化潜力
筛选针对 CSC 的治疗策略
监测疾病进展和治疗反应
注意事项：
成球实验的条件可能因肿瘤类型和细胞株而异。
成球形成效率可能受多种因素影响，包括细胞密度、培养基成分和培养时间。
成球本身并不总是 CSC，可能包含非 CSC 细胞。
联合使用其他标志物和功能实验来验证 CSC 的身份。
