小鼠肌腱干细胞增殖周期（小鼠神经干细胞的分离及培养实验）
- 作者: 刘雨檐
- 来源: 投稿
- 2024-12-11
1、小鼠肌腱干细胞增殖周期
小鼠肌腱干细胞增殖周期
小鼠肌腱干细胞（TSCs）是存在于肌腱组织中的多能干细胞，具有自我更新和分化为肌腱细胞后代的能力。它们的增殖周期通常分为四个阶段：
G1 期（细胞间期）
TSCs 在 G1 期进行细胞生长和新陈代谢。
它们转录和翻译蛋白质，增加细胞大小和质量。
细胞周期检查点监控 DNA 损伤和修复。
S 期（合成期）
细胞复制其 DNA，准备分裂。
DNA 合成发生在 S 期，由 DNA 聚合酶执行。
G2 期（细胞间期）
TSCs 进行最后的细胞制备，进入有丝分裂。
它们合成纺锤体蛋白，用于染色体分离。
细胞周期检查点确保 DNA 复制完整无误。
M 期（有丝分裂）
TSCs 进入有丝分裂，分裂成两个子细胞。
染色体排列在有丝分裂纺锤体上，并被拉向细胞两极。
细胞质分裂（胞质分裂）导致两个独立的子细胞形成。
调控TSCs 增殖周期的调控涉及多种细胞内和细胞外信号。关键因素包括：
生长因子：如成纤维细胞生长因子 (FGF)、表皮生长因子 (EGF) 和胰岛素样生长因子 (IGF)。
细胞因子：如转化生长因子 β (TGFβ) 和 PDGF。
机械负荷：肌腱组织中的机械力会刺激或抑制 TSC 增殖。
微环境：富含胶原和透明质酸的肌腱微环境会影响 TSC 行为。
表观遗传调控： DNA 甲基化和组蛋白修饰可以调节 TSC 增殖相关基因的表达。
意义理解小鼠肌腱干细胞增殖周期对于了解肌腱组织发育、修复和老化的细胞机制至关重要。通过操纵这些因素，有可能改善肌腱损伤的治疗并开发针对肌腱病的干细胞疗法。
2、小鼠神经干细胞的分离及培养实验
实验材料鼠模型：
C57BL/6 小鼠
试剂：Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM/F12)
神经干细胞培养基（含 EGF 和 FGF）
B27 补充液
NeuroCult NSA 无血清培养基
Accutase 溶液
胰蛋白酶
滴定溶液（Trypan Blue）
培养板和培养瓶
培养箱（37°C，5% CO2）
实验步骤1. 小鼠脑组织收集
安乐 euthanize C57BL/6 小鼠。
取出大脑，放入盛有冰 DMEM/F12 培养基的培养皿中。
2. 脑组织去除脑膜
在显微镜下，使用无菌镊子小心地去除大脑上的所有脑膜。
3. 脑组织解离
将去脑膜的脑组织切成小块。
用胰蛋白酶溶液消化脑组织 30 分钟，37°C。
用 Accutase 溶液进一步消化 15 分钟，37°C。
4. 细胞悬液过滤
将消化后的细胞悬液通过 70 μm 细胞筛网过滤。
用 DMEM/F12 培养基洗涤细胞两次。
5. 细胞计数和活力测定
使用滴定溶液对细胞进行计数和活力测定。
6. 细胞分离
将细胞悬液接入含神经干细胞培养基和 B27 补充液的培养瓶中。
在 37°C，5% CO2 的培养箱中培养细胞 7 天。
形成神经干细胞集落（神经球）。
7. 神经球采集和传代
用 Accumax 溶液收集神经球。
将神经球接种到含 NeuroCult NSA 无血清培养基的培养皿中。
每 35 天传代一次细胞。
8. 神经干细胞培养
培养神经干细胞至达到所需的密度或成熟度。
保持细胞培养环境的无菌和恒定。
9. 细胞鉴定
使用免疫荧光染色或流式细胞术鉴定神经干细胞。
检测神经干细胞标记物，如 Nestin、Sox2 和 Pax6。
3、小鼠肌腱干细胞增殖周期是多久
11.6 小时
4、小鼠肌腱干细胞增殖周期多长
约 1824 小时
