间充质干细胞流式细胞（间充质干细胞流式细胞仪结果图描述）
- 作者: 郭艺澄
- 来源: 投稿
- 2024-12-11
1、间充质干细胞流式细胞
间充质干细胞流式细胞术
原理流式细胞术是一种用于测量和分选单个细胞的强大技术。它利用流体动力学、光学和电子学的分选原则，可以根据细胞大小、形态、荧光和表面标记对细胞进行快速分析和分选。
间充质干细胞（MSCs）是一类具有多能分化潜能的成体干细胞，可分化为骨骼、软骨、肌腱、脂肪和神经等各种组织。流式细胞术是表征和分离 MSCs 的关键工具。
标记物MSCs 表达多种特异性表面标记物，可用于它们的识别和分离。常用的 MSC 标记物包括：
CD73
CD90
CD105
CD166
STRO1
这些标记物可以与荧光抗体结合，以便在流式细胞仪上检测。
应用间充质干细胞流式细胞术在干细胞生物学研究和临床应用中具有广泛的应用，包括：
鉴定 MSCs：流式细胞术可以通过测量 MSCs 特异性标记物的表达来鉴定和定量 MSCs。
分离 MSCs：流式细胞分选可以根据表面标记物从异质细胞群中分离纯化的 MSCs。
表征 MSCs：流式细胞术可以测量 MSCs 的大小、形态、表面标记物表达和细胞因子分泌。
监测 MSCs 分化：流式细胞术可以跟踪 MSCs 向特定谱系分化的过程，例如骨细胞或软骨细胞。
评估 MSCs 治疗功效：流式细胞术可以评估 MSCs 移植后的存活和归巢情况，以及对疾病或损伤的治疗效果。
优势间充质干细胞流式细胞术具有以下优势：
高灵敏度和特异性：荧光抗体标记允许以高灵敏度和特异性检测细胞表面标记物。
快速和高效：流式细胞术可以快速分析和分选大量细胞。
多参数分析：流式细胞仪可以同时测量多个参数，例如标记物表达、细胞大小和形态。
可扩展性：流式细胞分选技术可以从异质细胞群中分离纯化的细胞亚群。
结论间充质干细胞流式细胞术是一种多功能且强大的工具，可用于鉴定、分离、表征和监测 MSCs。这对于促进干细胞生物学研究，开发基于 MSCs 的治疗方法至关重要。
2、间充质干细胞流式细胞仪结果图描述
间充质干细胞流式细胞仪结果图描述
图例：散点图：显示细胞大小（FSC）与内部复杂性（SSC）的关系。间充质干细胞通常位于图中的右下象限中。
柱状图：显示标记物表达水平的百分比。
阳性门（Gate）：定义阳性细胞群的区域。
阳性标记物：
CD73：间充质干细胞的特征性表面标记物。
CD90：间充质干细胞的另一种特征性表面标记物。
CD105：内皮活化抗原，也是间充质干细胞的标记物。
阴性标记物：
CD34：造血祖细胞的标记物。
CD45：所有白细胞系（包括淋巴细胞和粒细胞）的标记物。
HLADR：主要组织相容性复合物 II 类分子，在激活的免疫细胞上表达。
结果图解读：
阳性标记物：阳性细胞群占据的百分比表明间充质干细胞的纯度。理想情况下，超过 95% 的细胞应表达所有三个阳性标记物。
阴性标记物：阴性细胞群的百分比表明其他细胞类型的污染。理想情况下，阴性标记物的表达应低于 5%。
散点图：散点图应显示明确的间充质干细胞群，与其他细胞群分离。细胞的大小和内部复杂性应与已知的间充质干细胞形态相一致。
注意：每个实验室对间充质干细胞表面标记物的具体要求可能有所不同。
流式细胞仪分析的结果依赖于所使用的抗体和分析门。
需要结合其他表征方法，例如培养、分化潜能和免疫组织化学，以全面表征间充质干细胞。
3、间充质干细胞流式标记国际标准
间充质干细胞（MSCs）流式标记国际标准
背景：MSCs 被广泛用于再生医学，需要准确的鉴定和表征。流式细胞术是 MSCs 表型分析的重要工具，为此需要建立统一的国际标记标准。
标准：核心标记（最低限度）：
CD90 (Thy1): 95% 以上阳性
CD73 (SH3 和 SH4 域)： 95% 以上阳性
CD105 (SH2 域)： 95% 以上阳性
次级标记（强烈推荐）：
CD29 (整合素 β1): 95% 以上阳性
CD44 (透明质酸受体)： 95% 以上阳性
CD45 (白细胞共同抗原)： 5% 以下阴性
CD34 (造血干细胞标记)： 5% 以下阴性
HLADR (II 类 MHC 抗原)： 5% 以下阴性
其他建议标记：
CD13 (氨基肽酶 N)： 大多数 MSCs 阳性
CD146 (MCAM/MUC18)： 大多数 MSCs 阳性
STRO1 (间充质干细胞标记)： MSCs 的亚群阳性
OCT4 (胚胎干细胞转录因子)： 一些 MSCs 阳性
SOX2 (胚胎干细胞转录因子)： 一些 MSCs 阳性
排除标准：
CD11b (整合素 αM)： < 20% 阳性
CD14 (单核细胞标记)： < 20% 阳性
CD19 (B 细胞标记)： < 20% 阳性
CD31 (内皮细胞标记)： < 20% 阳性
阳性门限：
上述所有阳性标记均采用荧光强度 99% 的同型对照设定门限。
阴性门限：
上述所有阴性标记均采用荧光强度 1% 的同型对照设定门限。
注意事项：
不同抗体克隆的表达程度可能有所不同，因此建议在验证之前测试多个克隆。
标记表达模式可能会因 MSCs 的来源、培养条件和其他因素而异。
应结合其他技术（如形态学和分化潜能）对 MSCs 进行综合鉴定。
4、间充质干细胞流式检测方案
间充质干细胞流式检测方案
目的：表征和鉴定间充质干细胞 (MSC) 群体
样品制备：
收集 MSC 样本（例如，骨髓、脂肪组织或脐带血）
按制造商的说明分离和培养 MSC
收获 MSC 进行流式细胞术分析
试剂：流式细胞仪
抗体：CD34FITC
CD45APC
CD73PE
CD90PECy7
CD105APCCy7
同型对照抗体
缓冲液（PBS 或 FACS 缓冲液）
步骤：1. 细胞表面染色：
将 MSC 细胞悬浮在含有靶抗体和同型对照抗体的缓冲液中。
孵育 30 分钟，4°C，黑暗条件下。
用缓冲液洗涤细胞。
2. 流式细胞术：
使用流式细胞仪获取细胞事件数据。
记录细胞群体的荧光强度和散射特性。
3. 数据分析：
对流式细胞术数据进行分析，确定表达特定标记的细胞群体的百分比和强度。
使用同型对照抗体进行门控，以减少非特异性染色。
预期结果：
正常 MSC 群体通常表达：
CD73+
CD90+
CD105+
CD34
CD45
注意事项：
使用高品质的抗体和试剂。
仔细优化孵育时间和抗体浓度。
包括适当的对照，例如未染色细胞或同型对照抗体染色细胞。
考虑细胞培养条件和传代次数对 MSC 表型的影响。
