牛胚胎干细胞的分离技术（牛胚胎干 🐒 细胞的分离技术是什 🍁 么）
- 作者: 马亦衡
- 来源: 投稿
- 2025-03-15
1、牛胚胎 🕊 干细胞 🦈 的分离技术
牛胚 🌺 胎干 🐟 细胞 🐴 的分离技术
材料：早期 🐴 胚胎（816细胞 🌴 期）
生 🌸 理 💮 盐 🌷 水
0.25% 胰酶溶 🦈 液 🌼
机械 🐵 移 🦅 液 🐼 管
无菌 🌳 培养 🐯 皿 🌲
步骤：1. 收集胚胎：小心 🐯 地从捐献体中排出卵 🐝 巢并收集胚胎。
2. 清洗胚胎：用生 🐡 理盐水清洗胚胎，去除残留的组织。
3. 酶消化：将胚胎转移到含有胰 🦟 酶溶液的培养皿中，孵育 510 分，钟以消化细胞连接蛋白。
4. 离心：将消化物用机 🐡 械移液管吹打均匀，然后离心 10 分钟，1000 rpm。
5. 收集上清液：小心吸取上清液，其中含 🕊 有胚胎干细胞。
6. 转移到培养基：将上清液转移到含有胚胎干细 🌷 胞培养 🐠 基 🐧 （如培养基 ES 的培养）皿中。
7. 培养：将培 🐴 养皿置于 37°C、5% CO2 的培养箱 🌿 中培养，天 47 。
注意：在整个过 🐳 程中保持无菌操作至关重要。
胰酶消化时间和离 🦁 心 🦊 速度会影响干细胞的存活率和质量。
分离后的 🐧 胚胎干细胞应立即培养或冷冻保存。
用途：分离的牛胚胎干细胞可用 🐒 于广泛的应 🌷 用，包括：
研究牛胚胎发育 🌳 和分化
产生转基因牛以 🦊 产生药物或其他产品 🦊
细胞治疗和再生 🦉 医学
2、牛胚胎 🐅 干细胞的分离技术是 🕷 什么
牛胚 🍁 胎干细胞的分离技 🐒 术
牛胚胎干 🍀 细胞 🐘 (bESC) 的分离通常遵循以下步 🦁 骤：
1. 胚 🦍 胎采 🐛 集 🌹
从受 🐠 精后的牛胚胎中收 🕸 集胚泡。
通常在受精后 🦈 710 天采集胚泡。
2. 内 🦢 细 🌿 胞团 🌷 (ICM) 分离
从胚泡中分离出内 🐦 部细胞团 (ICM)。
ICM 是胚 🐼 胎中最终分化为胚胎 🐧 干 🦍 细胞的细胞群。
3. 培 🌿 养
将 ICM 放置在富含生长因子 🦅 的无血清培养基中培养。
生长因子促进 ICM 细胞的 🌸 增殖和 ☘ 分化。
4. 胚胎干细胞培 🌵 养物建立
在适当的培养条件下，ICM 细胞增殖并形成胚胎干 🍁 细胞培养物。
这些培养物包含未分化的 bESC，具有自 🐴 我更新和多向分化的 🌼 能力。
具体技术分离 bESC 的具体技术可能有所 🐋 不同，但通常包括以下步骤：
手动分离：使用显微解剖仪或 🐛 解剖刀从胚泡中机械分离 ICM。
激光分离：使用激 🦟 光束从胚 🌲 泡中剔除 ICM。
化学分离：使用酶或其他 🦅 化学试剂溶解胚泡的外围层，释放 ICM。
质量控制分离后，bESC 培，养物经过仔 🐎 细检查以 🕸 确保其 💮 ：
形态学 🐝 特征：具有特征性的胚胎干细胞形态 🌵 。
Oct4 表达：Oct4 是一种胚胎干细胞特异性标 💮 志物 🐛 ，其表达指示细 🌿 胞的未分化状态。
多向分化潜 🦋 能能：够分化为外胚层、中胚层和内胚层 🌾 细胞，代表着分化成所有组织类型的潜力。
3、牛胚胎干细 🌵 胞的分离技术有哪些
牛胚 🐳 胎干 🐴 细胞的分离技术
1. 免 🌿 疫 🦉 磁 🐯 珠分选
使用抗体结合胚胎干细胞表面特异 🦊 性标记物，例如 SSEA1、SSEA3 和 TRA160。
与免疫磁珠结合的细胞被分离出来 💐 ，形成胚胎干细胞富集群体。
2. 流式 🐵 细胞术 🌴 分 🦋 选
使用 🐈 荧光抗体标记胚胎干细胞表面标记物，例如 SSEA1 或 Oct4。
标记 🕷 的细胞通过流式细胞仪分选出来，收集纯化的 🌷 胚胎干细胞群体。
3. 组织化学选择 🌸
使用酶解 🐞 处理胚胎，分离 🌿 出单 🐕 个细胞。
将细胞培养在 🦍 含有特异性生长因子的培养基中，刺激胚胎干细胞增 🐞 殖。
胚胎干 🐯 细胞通过显微镜观察和免疫组织化学分 🐺 析进行识别和选择。
4. 基因 🐡 敲 🪴 入
将荧光蛋白或抗性基 🌷 因插入胚胎干细胞基因组中。
荧光蛋白表达或抗 🐯 性基因筛选使胚胎干细胞群体可视化和富集。
5. 内细 🌷 胞团培 ☘ 养 🐛
从胚泡 🦄 中移除内细 🐈 胞团，其中包含胚胎干细胞。
内细胞团 🐟 在适当的培养条 🌺 件下培养，允许胚胎干细胞增殖和形成球状菌落。
6. 胚 🐕 胎干细胞特异性抗体 🐟 分选
开发了 🐞 针对胚胎干细胞表面特异性标记物的单克隆抗体 🦆 ，例如 mAb162 和 💐 mAb172。
这些抗体 🐴 与磁珠结合并用于磁 🐛 性激活细胞分选，从而富集 🐯 胚胎干细胞。
4、牛胚胎干细 🌾 胞的分离技术原理
牛 🦅 胚胎 🦢 干细胞（bESCs）的 🦆 分离技术原理
胚胎干细胞是从早期胚胎中分离出的具 🪴 有自我更新和分化成各种细胞类型的多能干细胞。以下是一般从牛胚胎中分离的 bESC 技术原理：
1. 胚 🐶 胎采 💐 集 💐 ：
从配种的雌牛中收集 78 天龄的囊胚 🌺 期胚胎。
2. 透明带 🌺 去除：
使用酸性酪蛋白酶或实验动物用透明质酸酶去除包围胚胎的透明带使，内细胞团暴露 🦢 出来。
3. 内细胞团分离 🕷 ：
使用机械方法或酶促消化 🕊 （例如胰蛋白酶）将内细胞团从滋养层中分离出来。
4. 细 🌿 胞接 🐯 种 🦆 ：
将 💐 分离出的内细胞团 ☘ 接种到含有滋养层条件培养基的培养皿中。
5. 胚胎外滋 🪴 养 ☘ 层 (TE) 形 🌳 成：
培养一段时间后，内，细胞团会分 🪴 化形成胚胎外滋养层内层形成 🦟 bESC。
6. bESC 挑 🐡 选：
使 🐠 用免疫标记（例如 SSEA1 或 Oct4 抗体）挑选出具有 bESC 特征的细胞。
7. 培养 🐳 和扩大：
将挑选出的 bESC 转移到 🌵 新的 🦍 培养皿中，并使用特殊的培养基和生长因子进行培养和扩大 🐛 。
关键点：维持 bESC 多能性的关键因素是使用 LIF（白细胞 🦆 抑制因子）或其他抑制细胞分化的信号通路抑制剂 🦢 。
bESC 的分离要 🦍 求谨慎的技术，以防止细胞损伤或污染 🐬 。
分 🐶 离后的 bESC 可以冷冻保存用于未来的研究或 🌹 应用。
