骨髓间质干细胞分 🦁 离 🕊 培养（骨髓间充质干细胞原代培养实验报告）
- 作者: 刘玺润
- 来源: 投稿
- 2025-02-05
1、骨髓间质干细胞分 🦊 离 🐴 培养
骨髓间质 🐕 干细 🐶 胞分 💮 离培养
目的从骨髓中提 🕷 取和分离间质干细胞（MSCs），用于研究和临床应用。
材料骨髓采集器和 💮 针筒
肝素无菌 🦢 培 🌿 养基 🦉
培养瓶或 🌻 培养皿
FBS（胎牛血 🌴 清）
抗生素步骤
1. 骨髓采 🌳 集 🐎
从捐赠者或动物股骨 🐯 或髂骨 🦢 中采集骨髓。
使用 🐟 肝素抗凝，防止凝血。
2. Ficoll 梯度 🦈 离 🌵 心
将骨髓稀 🦍 释并分 🐼 层 🐈 在 Ficoll 密度梯度介质上。
离心以分 🌵 离单核 🐴 细胞（MNCs），其中包含 🦁 MSCs。
3. 贴 🐟 壁 🐧 分离 🐴
将 MNCs 种 💮 植在培养瓶或 🕸 培养皿中 🦟 。
培养液 🦁 中 🐦 加入 FBS 和抗生素。
培 🕷 养 12 周，MSCs 会，贴壁生长而其他细胞会悬浮并被移除。
4. 扩增和 🍀 传代
当 MSCs 达到 8090% 的融 🦋 合度时，收 🌷 集并传 🦢 代至新的培养瓶中。
持续更换培养液 🐟 ，确保 🐬 细胞生长和存活。
5. 表 🐟 征 🐛
使用流 💐 式细 🐴 胞术或免疫组化 🦟 染色对 MSCs 进行表征。
常见 🌲 的 MSCs 标志 🦁 物包括 CD44、CD73 和 CD90。
还 🌻 可以测试 MSCs 的分化潜能，包括骨、软骨和脂肪。
注意事项维持无菌环境 🦟 以防 🌲 止污染。
定期监测 🪴 细胞生长和健康状况。
分离的 🦊 MSCs 应冷冻 🐟 保存以备将来使用 🐼 。
应用骨髓间质干细胞在再生医学、组织工程和疾病治疗 🦁 中具有广泛的应用，包括：
骨 🐱 和软骨再生 🐋
心肌梗塞治 🌷 疗 🦄
神 🌸 经系统 🌷 疾病治疗 🪴
免 🐯 疫 🍁 调 🌷 节
2、骨髓间充质干细胞原代培养 🦆 实验报 🦍 告
骨髓 🐧 间 🌺 充质干细胞 🌸 原代培养实验报告
骨髓间充质干细胞（BMSCs）是一种多能干细 🌵 胞，具，有分化为多种间充质 🐵 谱系细胞的能力包括成骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞。BMSCs 已。被广泛用于组织再生和修复中原代培养 🦁 是 BMSCs 体。外培养的 BMSCs 基。础步骤本实验报告描述了小鼠骨髓中的原代培养方法
材料 🐋 和 🌴 方法
材料小鼠
无菌 🌻 手 🦟 术 🦈 器械
培养基 💮 （αMEM，含 10% FBS）
抗生素（青 🐒 链霉素 🌴 链霉素/）
胰 🌲 蛋白 ☘ 酶EDTA
培 🐟 养瓶和 🐘 培养 🦍 板
方法1. 小 🌺 鼠麻醉和骨髓获取小鼠麻醉：后，用无菌手术器 🐛 械切开小鼠股骨小。心。地从股骨中抽取骨髓
2. 骨髓细胞悬液制备：将骨髓转移到含有无菌培养 🌻 基的培养皿中。加入 🐅 胰蛋白酶EDTA，并在 37°C 孵育 30 分。钟
3. 细胞过滤和 🦋 离心：使用细胞滤 70 μm 网过滤细胞悬液，去除组织碎片。将细胞悬 🐱 液离心 5 分 🐦 钟，1200 rpm。
4. 细胞重悬和接 🦊 种：小心地除去上清液。用培养基重悬细胞，并。将细胞接种到培养瓶或培养板中
5. 培养：在 37°C、5% CO2 条件下培养细胞。每 23 天。更换一次培养 🐳 基
结果培养 714 天后，贴，壁细胞呈典 🐳 型的纺锤体形生长迅速。这，些细胞经流式细胞术分析证 🐘 实为 BMSCs。
讨论原代 🐅 BMSCs 培 BMSCs 养是研究生物学和临床应用的基础。该 BMSCs 实 🐠 验报告描述了一种简单有效的原代培养方法，可用 🐋 于获得高质量的 BMSCs。所 BMSCs 培养的。形态学和免疫表型特征与既往报道一致
结论本研究 🌺 建立了一种成功的小鼠骨髓间充质 🕊 干细胞原代培养方法。该方法可为进一步研究 BMSCs 分化、再。生和修复 🦆 特性提供实验基础
3、骨 🌻 髓间充质干细 🐬 胞培养基怎么配
骨髓间充质干细胞 🦉 培 🦆 养基配方：
成分 🦆 | 浓度
||Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) | 基 🐒 础液 🌲
胎 🐵 牛 🦆 血清 (FBS) | 10%
青霉 🦆 素链霉素 🦉 液 | 1%
L谷 🕊 氨酰胺 🌵 | 2mM
Ascorbic acid | 50μg/mL
甘油磷酸二 🌷 甲酯 (βGP) | 10μg/mL
人 🐡 表皮生长 🐈 因子 (hEGF) | 20ng/mL
人血 🐟 小板由来生长因子 (hPDGF) | 10ng/mL
制 🌳 备步 🐅 骤：
1. 在无菌环境中，将所需的 DMEM 体积转移至 🐴 一个无菌容器中。
2. 加入 🐒 10% 的 FBS。
3. 加入 1% 的青霉素链霉 🕊 素液。
4. 加 🐺 入 2mM 的 L谷氨酰胺。
5. 加 🦁 入 🌻 50μg/mL 的 Ascorbic acid。
6. 加 🐒 入 🌻 10μg/mL 的 🐺 βGP。
7. 加入 20ng/mL 的 🌿 hEGF。
8. 加 🍀 入 10ng/mL 的 🐵 hPDGF。
9. 彻 💮 底混 🐟 合均匀 🦉 。
注意：培养基成分的浓 🌵 度可能会因具体的细胞系和研究目的而异。
在 🕷 使用前应始终过滤培养基，以去除任何污染物。
培养基 🐒 应储存在 4°C 下，并 🦟 在使用前放置在室温下。
培养基应每 35 天更换一次，或根据 🐵 细胞的生长情况。
4、骨髓间充质干细 🌼 胞bmsc
骨髓 🌴 间充质 🐎 干 🌻 细胞 (BMSC)
定义：BMSC 是一组多能干细胞，存在于骨髓中。它，们具有自我更新和分化为各种细胞类型 🦊 的能力包括骨细胞、软骨细胞、脂。肪细胞 🌸 和肌腱细胞
来源：BMSC 从骨髓中分 🐋 离出来，通常通过抽取骨髓样本。它。们可以在培养基中扩 🦈 增并保持其干 🐡 细胞特性
特性：多能性：BMSC 可 🦊 以分 🦟 化为多种细胞类型，包：括
骨 🦅 细胞（成 🐈 骨）
软 🐞 骨细胞 🌹 （成软 ☘ 骨）
脂肪 💐 细胞 🐎 （成脂 🌼 ）
肌 💮 腱细胞（成肌腱 🐅 ）
自我更新 🐵 ：BMSC 能够自我更新和增殖，从而维持其 🐳 干细 🌹 胞库。
免 🍀 疫调节：BMSC 具 🍁 有免疫调节特性，可以抑 🍁 制免疫反应。
归巢 🪴 能力：BMSC 可以归巢到 🐯 损伤或疾病部位，并参与组织修复。
应用：BMSC 在再生医学和组织工程中具有 🐝 广泛的应用，包括：
骨组织修复：促进骨骼再生，治疗 🐺 骨缺 🐦 损和骨折。
软骨组织修复修复 🌾 软骨：损伤，治疗骨关 🐺 节 🐛 炎等疾病。
心肌修复：促进心 🕸 肌再生，治疗心脏病 🌺 。
神经再 🐋 生：促进神经再生，治疗脊髓损伤和神经疾病。
免疫调节：治疗免疫 🌷 系统疾病，例如移植物抗宿主病和自身免疫疾病。
研究：BMSC 仍是一个活跃的研究领域 🌷 ，科学家正在探索它们在 🐞 组织修复、再生医学和疾病治疗中的进一步应 🌷 用。
