12孔板培养干细胞（12孔培养板细胞量及培养液体量）
- 作者: 王希柠
- 来源: 投稿
- 2024-12-11
方法
1、12孔板培养干细胞
12孔板培养干细胞
材料12 孔板
干细胞培养基
无血清培养基
移液器细胞刮板
显微镜方法
1. 配制培养基
按照制造商的说明，准备好含有血清的干细胞培养基。
配制无血清培养基，用于分离和清洗细胞。
2. 准备细胞
从培养瓶中分离干细胞。
用无血清培养基 промыть 细胞并离心沉淀。
resuspend 细胞于血清培养基中。
3. 分配细胞
用移液器将细胞悬液分配到 12 孔板的每个孔中。
每孔接种 50,000100,000 个细胞。
4. 培养细胞
将细胞板置于 37°C、5% CO2 培养箱中。
每 23 天更换培养基。
5. 分离和清洗细胞
当细胞达到 8090% 的汇合度时，分离和清洗细胞。
用无血清培养基 промыть 细胞板。
用细胞刮板轻轻刮掉细胞。
用无血清培养基 resuspend 细胞并离心沉淀。
6. 传代细胞
resuspend 细胞于新鲜的血清培养基中。
将细胞按 1:2 或 1:3 的比例接种到新的 12 孔板中。
提示使用高质量的培养基和补剂。
保持细胞培养环境无菌。
定期监测细胞生长情况并更换培养基。
分离和清洗细胞时要小心，避免损坏细胞。
如果细胞生长速度较慢，可以延长培养时间或调整接种密度。
2、12孔培养板细胞量及培养液体量
12 孔培养板
细胞量与细胞类型和实验要求有关
一般起始细胞量为每孔 0.52 x 10^5 个细胞
培养液体量
培养液体量应足够覆盖细胞，但不应过多
建议培养液体量为每孔 0.52 mL
指导原则起始细胞量和培养液体量会影响细胞生长和分化。
对于附着细胞，细胞量应足够形成单层细胞。
对于悬浮细胞，培养液体量应足以防止细胞沉淀。
随着细胞生长，培养液体量可能需要增加，以提供足够的营养和去除代谢废物。
重要的是要定期监测培养，并根据需要调整细胞量和培养液体量。
3、12孔细胞培养板加多少ml液体
10 ml
