北京大鼠原代干细胞购买（北京大鼠原代干细胞购买价格）
- 作者: 郭熙宁
- 来源: 投稿
- 2024-12-11
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4、大鼠脂肪干细胞原代培养
大鼠脂肪干细胞原代培养
材料大鼠脂肪组织
1X PBS
消毒用75% 乙醇
胶原酶溶液 (1 mg/mL)
DMEM/F12 培养基
FBS (胎牛血清)
抗生素/抗真菌剂
培养瓶/培养板
方法1. 组织采集：
麻醉大鼠，收集腹部脂肪组织。
用 75% 乙醇消毒采集部位。
2. 组织匀浆：
将脂肪组织切成小块，在 1X PBS 中冲洗以去除血液。
将脂肪组织转移到灭菌烧杯中，用胶原酶溶液消化 30 分钟，37°C。
每 10 分钟涡旋一次组织。
3. 离心：
停止消化过程，将悬浮液转移到 50 mL 离心管中。
1200 x g 离心 10 分钟，4°C。
4. 收集细胞：
吸取上清液，轻轻地将细胞沉淀重悬于 DMEM/F12 培养基中，补充 FBS (10%) 和抗生素/抗真菌剂。
5. 过滤：
将细胞悬浮液通过 100 μm 滤网过滤，以去除未消化的组织。
6. 培养：
将过滤后的细胞悬浮液接种到培养瓶或培养板中。
培养基体积应根据培养容器的表面积而定。
将细胞置于 37°C、5% CO2 的培养箱中培养。
细胞特性大鼠脂肪干细胞为梭形细胞，贴壁生长。
培养 1 周后，细胞将达到 8090% 的汇合度。
脂肪干细胞具有多分化潜能，可分化为脂肪细胞、成骨细胞和成软骨细胞。
注意事项使用无菌技术进行所有操作。
注意细胞密度，避免过度贴壁。
定期更换培养基 (23 天一次)。
细胞培养期间监测培养物是否有污染迹象。
传代细胞时，使用胶原酶溶液消化 510 分钟。
