脂肪干细胞的提取培养（脂肪干细胞的提取培养方法）
- 作者: 胡南枫
- 来源: 投稿
- 2024-12-11
1、脂肪干细胞的提取培养
脂肪干细胞提取培养
材料：脂肪组织
无菌培养基（DMEM/F12、FBS）
胶原酶胰蛋白酶
离心机培养皿
培养基
步骤：
1. 脂肪组织收集：
在无菌条件下，从供体提取脂肪组织。
通过吸脂术或腹部抽脂术等方法获取。
2. 消化和解离：
将脂肪组织洗涤并切碎成小块。
将胶原酶溶液加入脂肪块中，孵育以消化结缔组织。
用胰蛋白酶进一步消化，以释放脂肪细胞。
3. 离心：
将消化后的悬浮液离心，以分离脂肪细胞。
上层为脂肪层，中层为水相层，内含干细胞。
4. 收集干细胞：
取出水相层，并用无菌培养基洗涤。
离心，收集干细胞沉淀。
5. 培养：
将干细胞悬浮在无菌培养基中，接种到培养皿中。
在标准培养条件下（37°C、5% CO2）培养。
6. 扩增：
定期更换培养基，以提供营养和去除代谢废物。
当干细胞达到汇合度（约 80%）时，进行传代。
7. 定量和表征：
使用细胞计数器定量干细胞。
通过流式细胞术或免疫组织化学等方法表征干细胞，以验证其身份和特性。
注意事项：
严格遵守无菌操作，以防止污染。
使用高质量的试剂和材料。
优化培养条件，以最大程度地促进干细胞生长。
定期监测干细胞的健康状况，如增殖率、活力和分化能力。
2、脂肪干细胞的提取培养方法
脂肪干细胞的提取培养方法
材料和试剂
脂肪组织样品
脂肪组织处理液
PBS（磷酸盐缓冲液）
胰蛋白酶
胎牛血清（FBS）
干细胞培养基（含生长因子）
培养皿和培养瓶
离心机步骤
1. 脂肪组织采集
从皮下或腹膜组织中采集脂肪组织样品。
将样品放置在含有脂肪组织处理液的容器中。
2. 消化
用胰蛋白酶消化脂肪组织样品，释放脂肪干细胞。
消化时间和胰蛋白酶浓度取决于脂肪组织类型。
3. 离心分离
消化后的样品进行离心，分离出脂肪干细胞。
脂肪干细胞位于培养液与脂肪层的中间层。
4. 收集脂肪干细胞
用吸管小心吸取脂肪干细胞层。
将脂肪干细胞悬浮在PBS中，并通过细胞过滤器过滤。
5. 培养
将脂肪干细胞悬浮在含有FBS和生 长因子的干细胞培养基中。
将培养物置于37°C、5% CO2的培养箱中培养。
6. 传代
当培养物长满后，传代细胞。
用胰蛋白酶消化细胞，并按照步骤35进行操作。
注意事项脂肪干细胞的提取和培养需要使用无菌技术。
培养基的选择和生长条件对脂肪干细胞的生长至关重要。
培养期间监测细胞形态和生长状态。
传代时避免过高浓度的胰蛋白酶，以免损害细胞。
3、脂肪干细胞的提取培养原理
脂肪干细胞提取培养原理
提取脂肪干细胞涉及以下步骤：
1. 脂肪组织采集：
从腹部、臀部或大腿等部位提取脂肪组织。
使用肿胀液注入脂肪组织，以分离脂肪细胞。
2. 脂肪消化：
将肿胀脂肪组织消化成脂肪细胞和液体。
使用胶原酶等酶分解脂肪细胞之间的连接组织。
3. 分离：
通过离心将脂肪细胞、液体和碎屑分离。
脂肪细胞由于它们较轻而漂浮在液体的顶部。
4. 脂肪干细胞富集：
使用密度梯度离心或流式细胞仪对脂肪干细胞进行富集。
脂肪干细胞密度比脂肪细胞高，因此它们会沉淀在梯度的底部或通过流式细胞仪进行分选。
5. 培养：
将分离的脂肪干细胞置于富含生长因子的培养基中培养。
脂肪干细胞会粘附在培养皿上并增殖。
6. 传代：
当脂肪干细胞达到一定密度时，它们可以被传代到新的培养皿中。
传代过程可以扩增脂肪干细胞的数量。
培养条件：
脂肪干细胞培养的最佳条件包括：
培养基：含生长因子，如表皮生长因子 (EGF)、成纤维细胞生长因子 (FGF) 和血小板衍生生长因子 (PDGF)
培养温度：37°C
培养气体：5% 二氧化碳，95% 空气
通过遵循这些步骤，可以从脂肪组织中提取和培养脂肪干细胞，用于研究、再生医学和治疗应用。
4、脂肪干细胞培养注意事项
脂肪干细胞培养注意事项
1. 培养基选择
使用富含血清的培养基，如 DMEM/F12、αMEM 或 RPMI1640，添加 1020% FBS（胎牛血清）。
可补充生长因子，如 bFGF、EGF 或 IGF1，促进增殖。
2. 培养环境
培养在 37℃、5% CO? 的湿润环境中。
确保培养皿或培养瓶已涂布聚赖氨酸或胶原蛋白，以便细胞贴附。
定期更换培养基（每 23 天）以提供新鲜营养。
3. 细胞传代
当细胞达到 8090% 融合度时，进行传代。
使用 0.05% 胰蛋白酶EDTA 溶液消化细胞，然后离心并重新悬浮在新鲜培养基中。
接种 1:2 或 1:3 的比例。
4. 分化培养
要诱导脂肪分化，可使用含胰岛素、地塞米松和异丁基甲基黄嘌呤的培养基。
分化过程需要大约 1014 天，在此期间细胞会表现出脂质滴的形成。
5. 冷冻保存
使用含有 10% DMSO 的 FBS 作为冷冻液。
将细胞悬浮在冷冻液中，分装到冷冻管内。
以 80℃ 冷冻保存，或置于液氮中长期保存。
6. 其他注意事项
避免剧烈震荡或离心，以免破坏细胞。
培养早期应密切监测细胞生长和形态。
使用合适的抗生素或抗真菌剂以防止污染。
记录细胞传代和分化的信息，以追踪细胞培养历史。
