小鼠胚胎提取干细胞（干细胞是从胚胎中分离提取的细胞）
- 作者: 朱晨熙
- 来源: 投稿
- 2024-12-11
1、小鼠胚胎提取干细胞
小鼠胚胎提取干细胞
步骤：1. 胚胎获取：从怀孕 3.54.5 天的小鼠中获取胚胎。
2. 内细胞块（ICM）分离：小心移除胚胎的外围滋养层，留下中央的内细胞块。ICM 含有胚胎干细胞。
3. 机械分离：将 ICM 切片成小块。
4. 培养：将 ICM 块接种到特制的培养基中，含有生长因子和其他支持胚胎干细胞生长的成分。
5. 克隆形成：胚胎干细胞会增殖并形成克隆，这是单个干细胞及其后代形成的细胞群。
6. 筛选：使用免疫荧光或其他技术筛选阳性克隆，这些克隆表达特定的胚胎干细胞标记物，如 Oct4、Sox2 和 Nanog。
7. 扩增：将阳性克隆转移到新的培养皿中进一步扩增，以获得大量胚胎干细胞。
注意事项：
胚胎获取和处理必须谨慎，以防止胚胎损坏。
培养条件至关重要，需要优化温度、pH 值和营养素浓度，以支持胚胎干细胞的生长和自我更新。
筛查步骤需要准确可靠，以确保获得纯净的胚胎干细胞群体。
扩增过程必须受到严格监测，以保持细胞活力和自我更新能力。
应用：基础研究：研究胚胎发育、干细胞生物学和再生医学。
细胞疗法：用作干细胞来源，用于治疗神经退行性疾病、心脏病和其他疾病。
组织工程：生成用于器官修复和移植的组织。
药物发现和测试：用作药物筛选和毒性研究的模型系统。
2、干细胞是从胚胎中分离提取的细胞
不正确。干细胞可以从胚胎中提取，但也可以从其他来源提取，例如脐带血、骨髓和脂肪组织。
3、MEF小鼠胚胎成纤维细胞提取
MEF 小鼠胚胎成纤维细胞提取
材料：怀孕 13.5 天的小鼠胚胎
无菌 PBS
无血清培养基（DMEM 或 RPMI）
胰蛋白酶EDTA（0.25%）
胎牛血清（FBS）
培养皿和培养瓶
移液枪和移液管
步骤：1. 收集胚胎：在无菌条件下剖腹产生殖器，取出胚胎。
2. 去除胎膜：用无菌剪刀或镊子小心地去除胎膜，露出胚胎。
3. 洗涤胚胎：将胚胎用无菌 PBS 洗涤几次，去除残留胎膜。
4. 胰蛋白酶消化：将胚胎转移到含胰蛋白酶EDTA 的无血清培养基中。每克胚胎组织使用 1 mL 胰蛋白酶溶液。孵育 1520 分钟，37°C，摇晃。
5. 终止消化：消化完成后，加入等体积的含 10% FBS 的无血清培养基。充分混匀。
6. 过滤：将消化液通过 70 μm 细胞过滤器过滤到培养皿中。
7. 离心：将细胞悬液在 1500 rpm 下离心 5 分钟。
8. 去除上清液：小心地吸出上清液。
9. 重悬细胞：用含 10% FBS 的无血清培养基重悬细胞。
10. 接种：将细胞以适宜的浓度接种到培养瓶或培养皿中。
注意事项：
整个过程必须在无菌条件下进行。
胰蛋白酶消化时间根据胚胎的大小和年龄而异。
小心操作，避免损伤细胞。
提取的 MEF 细胞应培养在含有 10% FBS 的无血清培养基中。
4、骨片法提取小鼠间充质干细胞
骨片法提取小鼠间充质干细胞
材料：小鼠股骨或胫骨
无菌操作环境
PBS消化酶溶液（含胶原酶和透明质酸酶）
培养基（含 DMEM、10% FBS、1% 青霉素/链霉素）
离心机培养皿
步骤：
1. 采集和消毒股骨/胫骨
在无菌操作环境下，麻醉小鼠并将其安乐死。
将股骨或胫骨取出并浸泡在 70% 乙醇中 1 分钟，然后用 PBS 洗涤。
2. 切割骨片
使用无菌剪刀，沿骨干纵向剪开骨膜。
将骨膜内的骨髓组织刮出并转移至培养皿中。
3. 骨髓消化
加入 5 mL 消化酶溶液至装有骨髓组织的培养皿中。
将培养皿置于 37°C、5% CO2 孵箱中孵育 30 分钟，每 10 分钟混匀一次。
4. 过滤和离心
将消化后的细胞悬液通过 70μm 滤网过滤。
将过滤后的细胞悬液转移至离心管中，并以 400 x g 离心 5 分钟。
5. 重悬和扩展
去除上清液，并用培养基重悬细胞。
将细胞接种至培养皿中，并以 37°C、5% CO2 孵育培养。
6. 间充质干细胞的富集
次日，更换培养基以去除未粘附的细胞。
继续培养 710 天，直到细胞贴壁生长至约 80% confluency。
在培养期间，定期更换培养基。
7. 传代
当细胞达到 80% confluency 时，用胰酶消化细胞并传代。
将细胞传代至新鲜培养皿中，并以 1:3 或 1:4 的比例分裂。
结果：骨片法可以从小鼠股骨或胫骨中提取出间充质干细胞。
间充质干细胞具有贴壁生长、自我更新和多向分化的特性。
