小鼠牙髓干细胞提取（小鼠牙髓干细胞提取实验报告）
- 作者: 郭熙宁
- 来源: 投稿
- 2024-12-11
1、小鼠牙髓干细胞提取
小鼠牙髓干细胞提取
材料：68 周龄小鼠
冰 PBS
无菌注射器和针头（25G）
70% 乙醇
牙科钻无菌培养皿
aMEM 培养基
10% FBS
青霉素/链霉素溶液（1%）
胶原酶（2 mg/mL）
胰蛋白酶（1 mg/mL）
步骤：1. 麻醉小鼠：使用异氟醚或其他符合机构规定的方法麻醉小鼠。
2. 消毒手术区域：用 70% 乙醇消毒手术区域。
3. 提取牙齿：用牙科钻将上颌和小颌的磨牙拔出。
4. 去除牙髓：用无菌注射器和针头通过牙科钻头孔抽取牙髓。
5. 消化牙髓：将牙髓悬浮在含有胶原酶和胰蛋白酶的 aMEM 培养基中。在 37°C 孵育 1 小时，同时每 15 分钟涡旋混合一次。
6. 终止消化：向消化物中加入等体积的含 10% FBS 的 aMEM 培养基，以终止消化。
7. 离心：将消化物在 1200 rpm 下离心 10 分钟。
8. 收集细胞：弃去上清液，收集细胞沉淀。
9. 重悬细胞：将细胞重悬在含有 10% FBS 和 1% 青霉素/链霉素溶液的 aMEM 培养基中。
10. 培养细胞：将细胞接种到无菌培养皿中并培养在 37°C 和 5% CO? 的条件下。
11. 更换培养基：每 23 天更换一次培养基。
12. 扩增细胞：细胞达到 8090% 汇合度时，用胰蛋白酶消化并传代。
提示：使用无菌技术并在无菌环境下进行所有操作。
使用新鲜的动物组织。
优化消化条件以最大化细胞产量。
定期监测细胞生长情况并传代细胞以维持培养。
2、小鼠牙髓干细胞提取实验报告
小鼠牙髓干细胞提取实验报告
目的从小鼠牙髓中提取牙髓干细胞。
评估提取的细胞的特性和分化潜能。
材料和方法
材料小鼠牙
酶解液（胶原酶 I 和 II）
培养基（αMEM，10% FBS）
培养板胰蛋白酶EDTA
抗体（Stro1、CD44、CD34）
流式细胞仪
方法牙髓提取
1. 处死小鼠并提取下颌骨。
2. 小心移除软组织并暴露牙齿。
3. 使用牙科钻头打开牙髓腔。
4. 使用刮匙收集牙髓。
酶解1. 将牙髓悬浮在酶解液中。
2. 孵育 1 小时，37°C。
3. 过滤细胞悬浮液以去除碎片。
培养和扩增
1. 将细胞重新悬浮在培养基中。
2. 播撒在培养板中。
3. 在 37°C 和 5% CO2 培养 23 周。
4. 定期更换培养基。
表征免疫表型分析：
1. 使用抗体对细胞进行染色。
2. 通过流式细胞仪分析细胞表面标志物（Stro1、CD44、CD34）的表达。
分化潜能：
1. 将细胞培养在神经元或成骨细胞分化培养基中。
2. 评估分化标记物的表达（βIII微管蛋白、碱性磷酸酶）。
结果牙髓提取和细胞培养：
从每个小鼠牙中提取了约 100 万个牙髓细胞。细胞在培养中形成贴壁菌落并表现出增殖。
表征：流式细胞仪分析显示，提取的细胞主要表达 Stro1 和 CD44，而 CD34 的表达较低，这与牙髓干细胞的特征一致。
分化潜能：
当将细胞培养在神经元分化培养基中时，它们表达了 βIII微管蛋白，表明向神经元的分化。当培养在成骨细胞分化培养基中时，它们表达了碱性磷酸酶，表明向成骨细胞的分化。
结论从小鼠牙髓中成功提取了牙髓干细胞。提取的细胞表现出与牙髓干细胞一致的免疫表型和分化潜能。研究结果表明，小鼠牙髓是一个有前途的牙髓干细胞来源，用于再生医学应用。
3、小鼠骨髓干细胞attc
ATCC 小鼠骨髓干细胞
目录号：CRL2565?（未经处理）
CRL2565AD?（放射处理）
名称：小鼠骨髓间充质干细胞
来源：C3H/HeJ 小鼠
培养基：含 10% 小牛血清 (FBS) 的 alphaMEM
特点：多能性：具有在体外分化为脂肪细胞、软骨细胞和成骨细胞的能力
自我更新：能够长期自我更新，保持未分化状态
表面标志：CD44+、CD90+、CD105+、Sca1+
细胞大小：1525 μm
应用：骨骼组织工程和再生
软组织修复
细胞治疗
药物筛选
疾病建模
培养说明：
在 37°C、5% CO2 孵育器中培养。
使用含 10% FBS 的 alphaMEM 培养。
每 34 天传代一次，将细胞传代为 8090% 交汇。
注意事项：
这些细胞仅供研究用途。
使用前需进行适当的解冻和复苏程序。
这些细胞是活细胞，应按照生物安全指南进行处理。
4、小鼠牙髓干细胞提取方法
小鼠牙髓干细胞提取方法
材料：小鼠下颌
无菌 PBS 缓冲液
0.1% 胶原酶 I
DMEM/F12 培养基
胎牛血清 (FBS)
胰蛋白酶EDTA 溶液
15 毫升离心管
70% 乙醇
100 微米细胞筛
培养板或培养瓶
步骤：1. 组织分离
用无菌 PBS 缓冲液冲洗小鼠下颌。
在无菌手术台上小心移除下颌骨。
用 70% 乙醇消毒下颌骨 1 分钟。
2. 牙髓提取
用无菌剪刀沿下颌骨的冠状平面剪开。
用无菌镊子取出牙髓组织。
将牙髓组织转移到含有 1 毫升 PBS 缓冲液的 15 毫升离心管中。
3. 酶消化
向离心管中加入 1 毫升 0.1% 胶原酶 I 溶液。
在 37°C 的摇床中孵育 45 分钟。
4. 细胞分离
离心离心管 5 分钟，每分钟 300 x g。
吸出上清液。
用 DMEM/F12 培养基重悬细胞。
用 100 微米细胞筛过滤细胞悬液。
再次离心细胞，5 分钟，每分钟 300 x g。
5. 细胞培养
吸出上清液，用含 10% FBS 的 DMEM/F12 培养基重悬细胞。
将细胞转移到培养板或培养瓶中。
在 37°C、5% CO2 的条件下培养细胞。
6. 胰蛋白酶消化
当细胞达到 7080% 融合时，用胰蛋白酶EDTA 溶液消化细胞。
收集消化后的细胞，用含 10% FBS 的 DMEM/F12 培养基重悬。
离心细胞，5 分钟，每分钟 300 x g。
吸出上清液，用含 10% FBS 的 DMEM/F12 培养基重悬细胞。
将细胞转移到新的培养板或培养瓶中。
7. 鉴定
通过流式细胞术分析细胞表面标志物，如 Sca1、CD34、CD117 和 CD105，鉴定小鼠牙髓干细胞。
提示：使用无菌技术进行整个过程。
酶消化时间和胰蛋白酶消化条件可能需要根据具体实验条件进行优化。
所获得的细胞可能包含异质细胞群，因此在使用前进行鉴定非常重要。
