干细胞冻存步 🌻 骤教学（干细胞冷冻后会影响疗 🌼 效吗）
- 作者: 李南星
- 来源: 投稿
- 2025-02-10
1、干细胞冻存步骤教 🌻 学
干 🐛 细胞冻存步 🌹 骤教学
材料：干 🕷 细胞培养 🐛 物 🐛
冻存 🌵 培 🍀 养基（含 🦟 DMSO）
细胞 🐬 计数器
冻存管液氮罐
安 🍁 全 🐺 手 💮 套
防护服安 🐝 全护 🐕 目镜 🌻
步骤：1. 细胞制备 🐘 ：
收集处于对数生长期或亚对 🕸 数生 ☘ 长期增殖的干细胞培养物。
用冷的冻存培养基洗涤细胞两次 🦋 。
2. 细 🍀 胞计数 🐶 和 🕷 分装：
使用细胞计 🐘 数器计算细胞数量 🐳 。
根据所需的细胞数 🐶 量将细胞分装到冻存管中。（建议每管 15 x 10^6 个细胞 🐛 ）
3. 添 🐛 加冻 🌻 存培 🦉 养基：
向每个冻存管中加入冷 🐝 冻存培养基。
轻轻涡 🌾 旋 🐼 混合，以确保细胞均匀悬浮。
4. 降 💮 温 🐠 ：
将冻存管缓慢降 🐧 温至 80°C。
将冻存管放置在 80°C 冰箱 🐞 中保存过夜（1224 小时）。
5. 液 🐞 氮冻存：
使用安全手套小心地将冻存管从 🐯 80°C 冰箱中取出。
快速将冻存管 🐬 转移 🌲 至液氮罐 🦈 中。
将冻存管 🐱 沉没在液氮中至少 24 小 🐞 时。
注意：整个冻存过程中都应 🐦 保 🐦 持无菌。
使用合适的冻存 🦅 培养基，以防 🌳 止细胞损伤。
缓慢降温和快速冷冻对于维持细 🐬 胞活力至关重 🦉 要。
应在液氮罐中 🐯 长期保 🐬 存冻存的干细胞，以保持其活性。
解冻 🌼 步 🌳 骤 🐠 ：
将冻存管快速从液氮 🐞 中取出。
在 37°C 水浴中快速 ☘ 解冻冻存 🐴 管。
将 💮 解冻后的细胞转移至预热的培养基中。
轻轻离心，去除残留的 🦄 DMSO。
重悬细 🕊 胞并在适当的培养 🕊 基中培养 🦟 。
2、干细胞 🐬 冷冻后 🌹 会影响疗效吗
干细胞冷冻后是否会影响 🐠 其疗效取决于特定的细胞类型冷冻、方法和冷冻后 🐦 储存条件。
对疗 🦟 效的 🐡 影 🐒 响：
可能降低疗效：对于某些类型的干细胞，冷 🦊 ，冻和解冻过程 🌲 可能 🦉 会导致细胞损伤或死亡这可能会降低其增殖、分化和治疗潜能。
可能不影响疗效：一些类型的干细胞在冷冻后可以很好地存活，并且解冻后仍然 💮 保持其功能和疗效。
差异较大：不同类型的干细胞对冷冻的敏感性不同，其冷冻后的 🐡 疗效差异 🌺 也较大。
影 🦋 响疗效 🌻 的因素：
干细胞类型：胚胎干细胞和诱导多能干细胞 🐵 等未分化干细胞对冷 🌾 冻更敏感，而间充质干细胞和神经干细 🦉 胞等分化干细胞则更耐受。
冷冻方法：缓 🪴 慢冷冻法或 🌲 程序化冷冻法可以最大程度地减少细胞损伤。
冷冻后 🦆 储存条件：在液氮中长期储存可 🕸 以保持细胞活力。
解冻方法：快速解冻和适当的复苏介质可以最大程 🌲 度地减少解冻 🕊 损 🐼 伤。
结论：干细胞冷冻后对疗效的影响取决于具体的细胞类型和冷冻方法。不。能一概而论地说冷冻会影响所有类型的干细胞的疗效因此，在，使。用冷冻干细胞进行治疗时必须 🌷 考虑这些因 🐋 素并进行适当的冷 🌳 冻和解冻程序
3、干细胞冻存 🐟 步骤教学视频
干细胞 🦅 冻存 🌷 步 🦋 骤教学视频
材料：干细胞 🌷 悬 🕸 液 🦊
冷冻液 🦈 （如DMSO）
无菌 🍀 离心管
液氮罐步骤：
1. 制备 🐱 干细胞 🌷 悬液
根据 🌲 说明书将干细胞悬浮在合适的培养基中。
轻轻混匀 🌺 细 🌼 胞悬液。
2. 加 🦟 入 🌵 冷冻液 🐺
缓 🐝 慢加入冷冻液至干细胞悬液中，同时轻轻混匀 🕸 。
冷冻液与培养基的比例应根 🍀 据所使用的冷冻液说明书而 🐧 定 🌵 ，通常为 1020%。
3. 分 🌷 装细胞悬液
将干细 🌷 胞 🦋 悬 🐘 液分装到无菌离心管中。
每管的体 🐛 积通常 🐕 为 12 毫升。
4. 程 🐘 序降温
将离心管放入 🪴 冷 🌸 却速率 🦅 控制的程序降温仪中。
降温速率通常 🌵 为每分钟 🐳 12 摄氏度。
将细胞悬 🌳 液 🐛 降温至 80 摄氏 🐅 度。
5. 液氮 🕸 储存 🌼
将冻结的 🦆 离心管从程序降温仪中取出。
立即将离 🌹 心管 ☘ 转移至液氮罐 🐧 中。
提示：使用无菌技术进行所有操 🐱 作。
确保 🐟 冷冻液与 🦄 培养基充分混合。
避免过度混匀 🐘 ，以免损伤细胞。
使用程序降温仪可防止细胞在冻结过程中因冰晶形成 🌵 而受损。
细胞在液氮罐中的储存时间应 🌼 根据 🌴 说明书而定，通常可达数年。
4、干细胞 🍀 可以冷冻保存多久
干细胞冷冻保存 🍀 的时长取决于干细胞的类 🌵 型保存、方法以及储存条件 🦍 。
一般来 ☘ 说 🌷 ：
胚胎干细胞 🌺 ：通常可以保存10年以上，甚至更 🌴 长。
诱导多能干细胞 🕊 （iPSCs）：通常可以 🌻 保存510年。
成人 🐞 干细 🐎 胞：通常可以保存57年。
影响冷冻保存时 🐎 长的因素：
保存方法：玻璃化保存比传统的缓慢降温 🌺 冷冻法能 🌲 更好地保存干细胞。
储存条件：超 🌳 低温 🐯 冷冻（196℃的液氮中）可以长时间保存干细胞。
干细胞类型：不同的干细胞类型对冷冻保 🐱 存的敏感性不同 🐠 。
培养条件：冷冻前对干细胞的 🐠 培养条件也会影响其冷冻后的存活率和分化能力。
冷冻保 🐠 存后的活性 🌼 ：
冷冻保存 🦍 后，干，细胞的活性可能会 🌻 有所下降但这并不总是发生。如，果干细胞。经过适当的冷冻 🪴 和解冻程序它们仍可以保持分化和自我更新的能力
注意：这些 🐞 时长只是一般估计值，实际的冷冻保存时长可能因具体情况而异。重。要的是咨询专业的干细胞储存机构或研 🦍 究人员以了解特定干细胞类型和储存条件下的确切信 🐋 息
