ipsc干 🐼 细胞培养（ipsc诱导心肌细胞 🐼 共培养）

1、ipsc干 🐺 细胞培 🐝 养

诱导 🕷 多能干细 🌷 胞 🐈 （iPSC）培养

无血清培 🐞 养 🐕 基（如 mTeSR、StemMACS）

iPSC细 🌴 胞 🌴 株

Matrigel 涂层 🕷 培 🦄 养板或支架

岩石 🐴 抑制剂（如 Y27632，CHIR99021）

抗生素 🍀 抗/真菌剂（如/青霉素链霉素）

0.5 mM EDTA

1. 解 🦍 冻 iPSC

从液氮 🐡 中取出 iPSC 冷冻管并迅 🐝 速解冻。

将细胞悬液转移到含有无血清培 🦄 养基的离 🌿 心 🐱 管中。

2. 离心和重 🐅 悬细胞

以 🕸 300 x g 离心 5 分钟。

除 🦢 去 💐 上清液并用无血清培养基重悬细胞。

3. 播 🐵 种细胞

将细胞稀 🐱 释至 💮 合适的浓度（见下 🦟 文）。

将细胞悬液添加到 Matrigel 涂层的培养板或支架 🍀 中。

4. 培养 ☘

将细胞置 🌾 于 5% CO2 和 37°C 的培养箱中。

每 🐘 天更换培养 🐼 基 🌳 。

根据需要添加岩 🕸 石抑制剂 🌳 。

5. 传 🦄 代 🌹

当细胞达到 🪴 约 80% 的汇合度时进行传 🦍 代。

用 0.5 mM EDTA 处理细胞，以使其从培养板上脱落 🐅 。

收集 🕷 细胞并按照上述步骤 24 重新 🕸 播种。

细 🐟 胞密 🐕 度：

对 🐺 于 Matrigel 涂层的 🕷 培养板：每平 🐦 方厘米 50,000100,000 个细胞

对于支架：每毫升支 🐋 架 🐎 500,0001,000,000 个 🐈 细胞

使用高质量的无血清培养基以防止细胞分 🐺 化 🌷 。

避免过度 🐒 传代 ☘ ，因为这可能导致细胞特性发 🐠 生变化。

使用抗生素抗 🌻 /真菌剂 🌷 以 🐕 防止污染。

定期监测细胞 🌵 以 🦅 确保其保 🐘 持未分化状态。

2、ipsc诱导心肌细胞共 🦋 培养

iPSC诱导 🐝 心肌细胞共培养

iPSC（诱导多能干细胞 🦢 诱导）的心肌细胞 (iCM) 是研究心脏发育、疾病和治疗的一种有价值工具。共培养技术允许将 iCM 与其他细胞类型结合，以。模拟复杂 🌴 的心脏微环境

共 🐘 培养 🦢 的优点

增强成熟和功能性：与其他细胞类型的共培养可以刺激成 ☘ 熟 iCM 并获得 🐦 更成熟的表型和功能。

改善存活和分化：某些细胞类型，如，内，皮细胞和成 🐴 纤维细胞可 🐕 以提供生长因子和结构支撑促进 iCM 的存活和分化。

模拟 🌴 组织相互作用：共培养可以重建 🌿 心脏中的细胞间相互作用，从而提供对心脏功能和病理学的更深入了解。

共 🕸 培 🐬 养的细胞类型

用于 🌷 iCM 共培养的常见细 🐕 胞类型包括：

内皮细胞 🦈 ：形成血管，提供营 🌳 养和 🌷 氧气。

成纤维细胞 🐧 ：产生细胞外 🌻 基质，提供结构支撑和信号转导。

神经元 🌾 ：调节心脏电活动和 🦟 心肌收 🐋 缩。

免疫细胞 🐶 ：参 🍁 与心脏免疫调节和炎症反应。

iPSC 诱导心 🦋 肌 🐦 细胞共培养技 🐛 术已用于多种应用，包括：

疾病建模：研究心脏病（如心 🕊 力 🐯 衰竭和心律失 🌵 常）的发病机制。

药物筛选：鉴定和表征靶向 🌺 心脏细胞的药物。

再 🍁 生医 🕸 学：开发用于修复受损心脏组织的新型 🌸 治疗方法。

挑战和未来 🦈 方 🐧 向 🐡

尽管 iCM 共培养技术具有巨大潜力，但它 🌷 也面临一些挑战：

成熟程度： iCM 尚未达到与原生心肌细胞相同的成熟度，这限制 🐴 了它们的某些应用。

规模化：当 🐝 前技术需要小规模共培养，限制了其在转化医 🐼 学中的应用。

成 🦁 本和复杂性：共培养程序可能成本 🐺 高昂且 🕷 耗时。

未来的研究将集中在 🌲 解决这些挑战，提高 iCM 共培养技术的成熟度、规模和可及性这将。进。一步促进该技术在心脏疾病研究和治疗中的应用

3、IPSC诱导性多能干细胞 🐟

诱导 🌸 性多能干细胞 (iPSC)

IPS 干细 🐛 胞诱导过程

“IPSC 诱 🐘 导性多能干细胞”是指通过对体细胞进行转化而得到的 🦍 具有多能性的干细胞。该技术最初由日本科学家 🐦 山中伸弥于 2006 年。发明

iPSC 的诱导过程涉及将几个特定基因，例如 Oct4、Sox2、Klf4 和 cMyc，转染到体细胞中。这些基因称为“山中因子”，能，够，重。编程细胞使其恢复多能 🐒 性类似于胚胎干细胞

iPSC 的 🐯 优点

与胚胎干细胞相比，iPSC 具有以下 🍁 优点 🐴 ：

避免道德争议：iPSC 不需要使 🦄 用胚胎进行提取，因此避免了与胚胎干细胞使用 🐈 相关的道德争议。

个 🐋 性化治疗：iPSC 可以从患者自身细胞中诱导，这，意味 🐘 着它们具有患者特异性可以用于个性化 🐟 治疗。

广泛的 🦋 应 🐼 用：iPSC 具有分化为任何类型细胞的能力，因此可以用于研究、疾病建模和再生医学等广泛的应用。

iPSC 的 🦟 应 🌻 用 🌻

iPSC 在 🐋 以下领域具 🌻 有潜在应用：

疾病建模：通过使用来自患者的 iPSC，科，学家可以建立特定疾病的细胞模型用 🐞 于研究疾病机制和开发治疗方法。

再生医学 🦟 ：iPSC 可以分化成特定类型的细胞，例，如神经元或心脏细胞用于损伤 🐛 组织的修复和替换。

药物筛选：iPSC 可以用于筛选药物候选物以，评，估其有效性和安全性并减少动物试验的 🐒 需求。

个性化医疗：iPSC 可以用于开发针 🦊 对患者基因 🍁 组特性的个性化治疗方案 🌼 。

iPSC 的挑 🦟 战

尽 🌷 管 iPSC 技术具有巨大的潜力，但 🌿 也存在一些挑 💮 战：

重编 🦊 程效率低：诱导体细胞 🌳 转化为 iPSC 的效率仍然较低。

基因 🐒 组异常：iPSC 诱导过程中可能会出现基因组异常，影响其安全性和可 🦉 行性。

免疫排斥：如果 iPSC 用于移植，可，能会 🌺 引起免疫排斥反应需要免疫 🐠 抑制治疗 🐼 。

伦理考虑：即使 iPSC 避免了胚胎使 🪴 用，但，仍然涉及对体细胞进行遗传修饰这可能会引发伦理问题。