大鼠肝脏干细胞培养（大鼠肝脏 🐋 干细胞培 ☘ 养实验报告）
- 作者: 朱清妤
- 来源: 投稿
- 2025-03-02
1、大鼠肝脏干细胞 🦢 培养
大 🦅 鼠 🐯 肝脏干细 🦆 胞培养
材料：新鲜大鼠肝 🌼 脏 🌾
无菌手 🌻 术 ☘ 器 🐘 械
培养基 🍀 （如威廉氏培养 🐦 基E或DMEM）
胎牛 🐺 血 🐠 清 🌻 (FBS)
胶 🐬 原 🦆 酶 IV
DNase I
培养皿培养瓶
抗生 🌴 素抗真菌剂溶液 🐶
步骤：1. 肝 🐴 脏 ☘ 获 🐒 取：
使用无菌 🦋 技术获取新鲜大鼠肝脏。
将肝 🐯 脏放置在 🐅 无菌 🌸 培养皿中。
2. 分离肝细 🐟 胞 🐵 ：
在无 🐘 菌条件下，将肝脏切成小块。
将肝块 💮 转移 🌲 到含有 🐺 胶原酶 IV 和 DNase I 的培养基中。
孵育 3060 分 🐬 钟，37°C，搅拌。
3. 过 🐛 滤和离 🍀 心 🕷 ：
将悬浮 🌻 液通过 100μm 滤网过 🌿 滤以去除细 🌼 胞碎片。
将滤液离 🌴 心 🦈 10 分钟，4°C，1000 x g。
4. 肝 🐺 细 🐘 胞培养 🐟 ：
将 🕷 分离 🍁 的肝细胞悬 🦍 浮在含的 1020% FBS 培养基中。
将肝细胞播种到培 🐴 养皿或培养瓶中。
将培养 🍁 物置 🐘 于培养 🌺 37°C，5% CO2 箱中。
5. 干细胞 🐵 富 🌾 集：
培养 710 天后，肝细胞将贴 🐬 附和增殖。
定期更换培养基，去除未贴附 🍀 细胞。
使 🦊 用 FACS 或免疫细胞化学方法纯化 🐼 肝脏干 🌹 细胞。
培养基：大鼠肝脏 🐈 干细胞通常使用以下培养基：
威廉 🦉 氏E培养基 🐛 ，含 1020% FBS
DMEM，含 🌵 1020% FBS
添加 🐕 生长因子，如 EGF 或 HGF
抗生素抗真 🌴 菌 🦈 剂 🐶 ：
向培养基中添加抗生素抗真菌 🐬 剂溶液以防止细菌和真菌污染。
备注：大鼠肝脏干 🕸 细胞的培养需要无菌操作。
肝脏干细胞的培养条件和富 🦟 集方法 🐅 可能因具体应用而异。
建议定期监测培养物并 🐴 根据需要进行细胞传代。
2、大鼠肝脏干细胞培养实验 🐅 报告
大鼠肝脏 🦋 干细胞培养实验报告
肝脏是人体重要的解毒和代谢器官肝。损伤是一个严重的问题，会。导，致肝 🐛 。功，能。衰，竭。甚至死亡干细胞是具有自我更新和分化潜能的细胞它们可以用来再生受损的组织或器官大鼠肝脏干细胞是一种多能干细胞具有分化为肝细胞和胆管细胞的潜力 🕷 本实验旨在建 💮 立大鼠肝脏干细胞培养体系为肝损伤的治疗提供新的研究方法
材料和 🌼 方 🍁 法
材料大鼠
无 🕷 菌 🐕 条件 🐛
肝脏 🦁 解剖 🦍 器械 🌳
培养 🕷 基（DMEM/F12、10% FBS）
生长 🌵 因 🐟 子 🐒 （EGF、HGF）
抗生素（青 🐱 霉素链霉 🌴 素）
方法大鼠肝脏 🌵 干细胞分离
1. 处 🌹 死大鼠，取出 🐕 肝脏。
2. 使用 🌸 肝脏解剖器械分离出肝细胞和非肝细胞 🐵 部分。
3. 将非肝细胞部分进行消化 🦋 ，得到细胞悬液。
4. 使用磁性珠分 💮 选出干细胞，根据CD34或cKit等表 🐞 面 🌼 标志物。
大鼠肝 🐶 脏 🌳 干细胞培养
1. 将分离出的干细胞接种到培养基中培养基中，含 💮 有EGF、HGF和抗生素。
2. 将细 🐱 胞 🦅 培养于37°C、5% CO2的培养箱中。
3. 每隔23天 🐛 更换培养基。
干 🦋 细胞 🌴 鉴定
1. 免疫表型 🐘 分析：使 🐋 用流式细胞仪分析干细胞 🦅 表面标志物的表达，如CD34、cKit、Sca1。
2. 分化成肝细胞和胆管细胞：将干细胞诱导分化 🦅 为肝细胞或胆管细胞，并通过免疫染色或分RTPCR析其功能。
结果大鼠 🐳 肝脏干细 🌸 胞 💮 分离
成功 🐞 分离出大鼠肝脏干细胞群。免疫表型分析显示干细胞表，达CD34和cKit等。表面标志物
大鼠肝脏 🌹 干细 🦢 胞培 🌲 养
干细胞在培养条件下能够增殖和分化。免疫表型分析显示培养，的干细 🐈 胞，维。持了其表面标 🌿 志物的表达表明它们仍处于干细胞状态
干细 🐋 胞 🍁 鉴 🐝 定
诱导分化 🐈 实验表明 🦅 ，干细胞能够分化为肝细胞和胆 🐼 管细胞。免疫染色和分RTPCR析。证实了分化细胞的肝细胞或胆管细胞特异性标记物的表达
结论本实验成功建立了大鼠肝 🐎 脏干细胞培养体系。分离出的干细胞具有增殖和分化的能力，可。以，诱。导分化为肝细胞和胆管细胞该体系为肝损伤的治疗提供了新的研究方向为肝脏再生和修复奠定了基础
3、小鼠肝脏细胞培养实验报 🍀 告
小鼠肝 🐬 脏 🐴 细胞培养 🐎 实验报告
实验目的建立小鼠肝 🌿 脏细胞原代培养体系，并对其生物学特性进行初 ☘ 步研究。
实验材料幼小小鼠（雄性或雌 🕊 性，体 🕊 重约1015g）
DMEM培养基 🐦 （添加10%胎牛血清、1%青 🐞 霉 🌿 素链霉素）
胰 🐕 蛋 🐕 白 🐯 酶溶液（0.25%）
0.05%EDTA溶 🌺 液 🦆
无血清 🦢 培养 🌹 基（的基础上不添加胎牛 ☘ 血清）
MTT试 🦁 剂盒 🌷
肝脏细 🐺 胞 🦁 标 💐 记抗体（例如：CK18、AFP）
显微镜实验方法
1. 肝脏细胞 💐 分离
将幼小小鼠 🌴 处死，取出肝脏。
将肝 🌷 脏置于无菌培养 🐧 皿中，切 🌳 碎成小块。
加入胰蛋白酶 🌷 溶液，在37℃水浴振荡器中消 🍁 化30分钟。
加入等体积的0.05%EDTA溶液 🐕 终止 ☘ 消化 🦅 。
将细胞悬 🐺 液离心 🕸 （1200rpm，5分钟 🌵 ），弃上清。
加入DMEM培养 🌷 基，吹打重悬细胞。
2. 细胞 🌺 培 🌼 养 🐡
将细胞悬液接种到装有DMEM培养基的培 🌿 养板上。
将 🍀 培养板置于培养37℃、5%CO2箱中培养。
3. 细 🐈 胞鉴定 🦍
免疫 🐳 荧 🐕 光 🌹 标记：
取培养物，固定并渗 🐴 透。
加入肝 💐 脏细胞标记抗体 💮 ，孵 🐕 育过夜。
冲洗后 🦢 ，加，入荧光二抗 🕸 孵育1小时。
再次冲洗 🐺 ，在显微镜下观察 🐈 。
MTT法检测细胞增 💐 殖能力：
在不同时间点取出培养 🐡 物。
加 🦄 入MTT溶液，孵育4小 🦉 时。
弃上清，加 🌻 入二甲基亚砜溶解甲瓒蓝结晶。
测定 🐡 吸 🐘 光度 🍁 （570nm）。
实验结果1. 肝脏细 ☘ 胞分离
从小鼠肝脏组织中成功分离出细 🐶 胞悬液。
2. 细胞 🐕 培养
肝脏细胞 🦈 在DMEM培养 🌻 基中贴 🌾 壁生长良好。
3. 细 🐘 胞鉴 🌿 定
免疫荧光标记：细胞表达肝脏细 🐋 胞标 🪴 记物CK18和AFP，证实为肝脏 🦋 细胞。
MTT法 🍀 ：肝脏细胞表 🕸 现出良好的增殖能力，随，着培养时间的延长细胞数量 🦄 持续增加。
结论成功建立了小鼠肝脏细胞原代培养体系培养。的肝脏细胞具有良好的生物学特性，可，以用于进一步的研究 🐠 例如肝脏生理、毒。理学和疾病机制等方面
4、大鼠肝脏干 🌺 细胞培养多 🦍 少钱
大鼠肝 🐋 脏干细胞培养的成本可能因以下因素而异：
培养基 🌿 和试剂培养基：生、长、因子抗 🐡 生素 🌹 和其他试剂的成本。
培养皿和培养瓶：一次性或可重 🌵 复 🐺 使用的培养容器的成本。
培养 🐟 设备：孵化器、安全柜和显微镜 🐟 等设备的成本和维护费用。
人员费 🦍 用 🐒 ：培养和维护培养物的技术人员或研究人 🐟 员的工资。
质量控制：用于验证细胞身份 🐱 和纯 🐳 度的测试 🌿 。
根据培养規模、所需试剂和设备的不同，每批培养的成 🦍 本可能在数百到数千美元之间。
具 🐒 体而言，大鼠肝脏干细胞培养的成本可能 🕊 包括：
培养 🌷 基 🌷 ：每升 50100 美 🌷 元
生 🐛 长因子：每微 🐅 克 10100 美元
抗 💐 生 🌾 素 🦟 ：每毫升 15 美元
培 🦉 养 🐼 皿：每个 🦁 15 美元
培养瓶 🦈 ：每个 515 美元 🦄
孵化 🐬 器：每天 🦁 1020 美元 🐠
显微镜：一次性 🕸 购买 美元 🦄
建议向培养基和试剂供应商以及细胞培养设备制造商索取报价以，获得准确 🌴 的成本估算 🌵 。
