提取小肠干细 🐼 胞的步骤（小肠干细 🌳 胞是一类具有什么的细胞）
- 作者: 胡非晚
- 来源: 投稿
- 2025-03-27
1、提取小 🕷 肠干细胞的步骤
提取 💐 小肠干细 🐠 胞的步骤 🌼 ：
材料：新鲜小肠组 🌳 织
Hanks' 平 🐘 衡盐 🕊 溶 🦅 液 (HBSS)
乙二 🦁 胺四乙酸 (EDTA)
胰蛋白酶 🐎
胎 🐡 牛血 🐶 清 (FBS)
培养 🐬 基 (例如 DMEM/F12)
培养皿细 🌴 胞滤 🐳 器 (40 或 🐳 70 μm)
离心机吸管
步骤：
1. 组织 🐛 准 🌷 备 🍁
将 🐵 新鲜小 🌿 肠 🐬 组织彻底清洗干净，除去任何粘液或杂质。
将组织纵向切成 🦆 条状 🐬 ，长 🌺 度约 510 cm。
2. 酶 🐬 解 🦁
将组织条放入含有 EDTA (1 mM) 的 HBSS 溶液中，在 4°C 下孵育 30 分钟 🦋 。
将 HBSS 溶液更换为含有 🌿 胰蛋白酶 (2 mg/ml) 的 HBSS 溶液，在 37°C 下孵育 12 小，时或直至组织变为糊状 🐡 。
3. 机 🦆 械解聚
用吸管反复吹 🐱 打组织糊状物，直至组织完全解聚。
4. 过 🌸 滤 🌳
用 40 或 70 μm 的细胞滤器 🐬 过滤细胞悬液，除去任何 🌿 未消化碎片。
5. 离 🌼 心和 🍀 清洗 🦅
将细胞悬液在 300 x g 的速度下 🐠 离心 5 分钟 🐈 。
用 HBSS 或培养基清洗沉淀物并再次离 🐯 心。重复此 🐳 过程次 23 以。除去胰蛋白酶
6. 悬 🌻 浮 ☘ 和 🐝 培养
将沉淀 🌹 物悬浮 🐛 在培养基中，补充 1015% FBS。
将细胞悬液播入培养皿中，在 37°C 和 5% CO2 的环境中 💮 培养。
培养基成 🌳 分 🌻 ：
DMEM/F12 培 🕸 养基
1015% FBS
1% Pen/Strep
其他生 🦉 长因 🐡 子或 🐝 补充剂（根据需要）
提示：保持酶解 🪴 时间的一致性以确保细胞活力。
仔细过滤细 🌷 胞悬液可以去除未消化 🐠 碎片并 🦋 获得纯净的细胞群。
在培养过程中监测细胞并更换培养基以 🐵 保持细胞健康 🍁 。
2、小肠干细胞是一类具有什么的细 🦟 胞
自我更 🍀 新能力
3、提取小肠干细胞的 🌳 步骤是什么
提取小肠干细 🌵 胞 🌹 的步骤：
1. 样 🐼 品 🐴 采集 🕊 ：
从捐赠者的小肠中内镜检查 🐟 或手术切除 🦟 一份组织样品。
2. 组 🦊 织 🪴 解 🐋 剖：
将组织样本切成小块，并用酶（如胶原酶）进，行消化 🌵 以分离细胞 🐵 。
3. 过 🐕 滤 ☘ 和筛选：
将细胞悬液通过过滤 🦉 器或筛网，以去除细胞碎片 🌻 和未消化的组织。
4. 抗 🦁 体 🍁 标记 🌸 ：
使用与小肠干细胞表面标志 🐡 物（如 Lgr5、Bmi1）结合的抗体，对细胞进行标记。
5. 细 🐬 胞分选：
使用细胞分选仪，根据抗体标记将小肠干细 🌳 胞从其他细胞中分 🍁 选出来。
典型的分选方 🦈 法包括荧光激活细胞分选 (FACS) 或磁性激活细胞 🌴 分选 🐕 (MACS)。
6. 培 🌼 养 🌻 ：
将分选出来 🦢 的小肠干细胞接种到富含生长因子的 🦁 培养基中，以促进存活和增殖。
7. 鉴 🌻 定 🌹 ：
通过免疫荧光染 🐬 色、qPCR 或流式细胞术等技术，对，培养的细胞进行鉴定确认其为小肠干细胞。
8. 扩 🌷 增 🦍 ：
在适当的培养条件下，小，肠干细胞可以 🐎 扩增产生大量用于研究或治疗用途的细胞。
注意事 🐝 项：
提取小肠干细胞是一个复杂而技 🐎 术要求高的过程。
不同研究人员和实验室使用的具体方法可能略 🌹 有不 💐 同。
优化提 🦋 取过程对于获得高纯度和活 🌵 力的细胞至关重要 🐶 。
