干 🐺 细胞纯度考察方法 🦟 （干细胞纯度指标）

1、干细胞纯度考 🐳 察方法

干细 🦁 胞纯 🌸 度 🐕 考察方法

免 🦍 疫 🦅 表型 🐧 分析

流式细胞术：使用标记特 🕸 异 🌵 性蛋白的抗体来识别和定量特定细胞群 🦟 。

免疫荧光染色：将荧光标记的抗体与细胞培养物孵育，然后使用显微镜观察特异性 🦊 蛋白表达。

分选 🍁 和克 🦆 隆筛选

磁性 🦋 激活细胞分选（MACS）：使用磁珠标记靶细胞，然后在磁场中将它们与其他细胞分离。

流式细胞分 🦅 选（FACS）：根据细胞表面标志物标记细胞，然后根据荧 🐬 光强度对 🐝 细胞进行分选。

克隆筛选 🌿 ：将单个 🌼 细胞克隆到单独的 🍀 培养皿中，然后根据特异性标记或功能对其进行筛选。

分化成各种谱系：将干细胞分化为特定谱系的 🕷 细胞，例如脂肪细胞、骨细胞或神经元。

形成集落：将干 🐳 细胞接 🐡 种到半固体培养 🐼 基中形成，大小和形态不同的集落。

自我更新测定 🕷 ：长期培养干细胞并评估 🌷 其保持分化能力和增殖潜力的能力。

基因表 🐈 达分析

RTPCR：检测和定量 🐠 特异性基因的转录。

微阵列：评估数百或数千个基因 🐶 同时表达。

RNA 测 🐋 序：广泛表征转录组并检 🦅 测差异表达的基因。

细 🦈 胞形态学：镜检观察细胞形态以评估纯度和一致性。

Karyotyping：分析染色体核型以检测 🐕 染色体 ☘ 异常或嵌合体。

微生物检 🐧 测 💐 ：排除微生物 🐴 污染，例如细菌、病毒或真菌。

选择 🐞 方法的考虑因素 💐

干细 🌲 胞类 🦟 型 🐒

目 🕊 标纯度水平 🕊

可用 🦈 资 🐼 源 🦉

实验 🐺 条件 🐞

2、干细胞 🐧 纯度指标

干细胞 🐋 纯度指标 🕸

干细胞纯度是衡量干细胞样品中目 🐎 标干细胞类型比例的指标。以下是一些 🕊 用于评估干细胞纯度 🦅 的常见指标：

表面标记表达 🦋 ：

流式细胞术：使 🦁 用 🌷 抗体标 🐵 记特定表面蛋白，通，过流式细胞仪对细胞群进行定量分析计算表达目标标记的细胞百分比。

免疫显微镜：使用抗体对细 🪴 胞进行染色，然后在显微镜下观察细胞中 🌸 目标标记的表 🐼 达情况。

分 🐎 化能 🌷 力：

体外分化：将干细胞置于诱导分化的培养条 🌺 件中，然后检测分化成目标细胞类型的 🐒 细胞数 🕷 量。

体内成瘤：将干细胞 🌻 移植到免疫缺陷小鼠体内，观察是否形成含目标细胞类型的肿瘤。

基因表达分 🐛 析：

实时荧 🐯 光定 💮 量 🐎 PCR（qPCR）：检测样品中目标基因的表达水平。

RNA测序 🐛 （RNASeq）：对样品中的所有转录 🦉 本进行测序，分析目标基因的 🐛 表达。

其 🐧 他 🐬 指标：

克 ☘ 隆形成：将单个细胞接种到培养基中，观察它们形成克隆的能力。

细胞形态：通过显微镜观察细胞的形态特征，识别 🐼 目标干细胞类型。

剔除未分化细胞：使用针对未分化细胞的 🐟 抗体或培养条件，去除样品中未分化的细胞。

纯 🐈 度标 🐶 准 🐞 ：

干细胞纯 🐕 度的标准因应用和目标细胞类型而异。一般来说用，于再生医学的干细胞纯度应达到 90% 以。上

提高纯度的 🌷 策略：

分选：使用流式细胞术或磁性 🐡 分选分离出目标细胞类型。

培养条件优化：调整培养 🦟 基、生长 🍁 因子和基质，选择性促进目标干细胞的生长。

细胞扩增扩增：目标干细胞，同时 🐛 剔除 🌵 污染细胞。