皮肤纤维细胞与干细胞（人皮肤表皮干细胞及成纤维细胞的分离培养）
- 作者: 马珂芋
- 来源: 投稿
- 2024-12-28
1、皮肤纤维细胞与干细胞
皮肤纤维细胞
是皮肤真皮的主要细胞类型。
产生胶原蛋白、弹性蛋白和糖胺聚糖，提供皮肤的结构和强度。
调节伤口愈合和组织修复。
干细胞是未分化的细胞，具有分化为其他类型细胞的能力。
分布在皮肤的基底层和毛囊中。
对皮肤的更新、再生和修复至关重要。
皮肤纤维细胞与干细胞的关系
干细胞可以分化为皮肤纤维细胞。
皮肤纤维细胞可以分泌生长因子，支持干细胞的自我更新和分化。
皮肤纤维细胞和干细胞一起调节皮肤的稳态、愈合和再生。
皮肤纤维细胞与干细胞在皮肤衰老中的作用
随着年龄的增长，皮肤纤维细胞产生胶原蛋白和弹性蛋白的能力下降，导致皮肤松弛和皱纹。
干细胞的数量和分化能力也随着年龄的增长而减少，导致皮肤修复和更新能力降低。
因此，皮肤纤维细胞和干细胞的衰老是皮肤衰老的主要原因。
研究方向开发促进皮肤纤维细胞和干细胞功能的疗法，以改善皮肤衰老。
探索利用干细胞进行组织工程，修复受损的皮肤。
研究皮肤纤维细胞和干细胞在皮肤疾病中的作用，例如伤口愈合不良和纤维化。
2、人皮肤表皮干细胞及成纤维细胞的分离培养
人皮肤表皮干细胞及成纤维细胞的分离和培养
材料组织获取
新鲜人皮肤组织
细胞分离0.25% 胰蛋白酶
Dulbecco's PBS (DPBS)
胶原酶 IV
50 μg/ml 苯酚红
培养基表皮细胞生长培养基 (EpGM)
成纤维细胞生长培养基 (FGM)
培养容器培养皿
培养瓶
方法
表皮干细胞分离
1. 组织获取：从健康供体处获取新鲜皮肤组织。
2. 组织消化：将组织切成小块，并用 0.25% 胰蛋白酶处理 30 分钟，搅拌 37°C。
3. 分离表皮：用 DPBS 终止胰蛋白酶消化，并用镊子轻轻刮除表皮层。
4. 去表皮残留：将表皮悬浮液转移到离心管中，并用胶原酶 IV 消化 60 分钟，搅拌 37°C。
5. 表皮细胞分选：通过 50 μg/ml 苯酚红筛选表皮干细胞。
成纤维细胞分离
1. 真皮消化：将组织块放入装有胶原酶 IV 的培养皿中，并在 37°C 孵育过夜，搅拌。
2. 过滤：通过 70 μm 过滤器筛选悬浮液，以去除未消化的组织碎片。
3. 离心：将悬浮液在 1200 rpm 离心 5 分钟。
4. 重悬：用 FGM 重悬沉淀，并接种到培养瓶中。
培养表皮干细胞
将表皮干细胞悬浮液接种到 EpGM 中，并培养在 37°C、5% CO2 下。
每隔 23 天更换培养基。
成纤维细胞
将成纤维细胞悬浮液接种到 FGM 中，并培养在 37°C、5% CO2 下。
每隔 34 天更换培养基。
注意事项所有操作应在无菌条件下进行。
使用干净的培养皿和培养瓶。
避免过量消化，因为它会导致细胞损伤。
监测培养基 pH 值，并根据需要进行更换。
3、皮肤纤维细胞与干细胞的关系
皮肤纤维细胞和干细胞之间的关系
皮肤纤维细胞
存在于皮肤真皮层中
产生胶原蛋白和弹性蛋白等细胞外基质蛋白
提供皮肤结构和弹性
干细胞未分化的细胞，具有自我更新和分化为不同类型细胞的能力
在皮肤中，干细胞位于真皮乳头、毛囊和皮下组织中
可以分化为皮肤纤维细胞、角质形成细胞和神经细胞
关系皮肤纤维细胞的来源：皮肤纤维细胞起源于皮肤干细胞的分化。
干细胞的维持：皮肤纤维细胞分泌多种生长因子和细胞因子，有助于维持干细胞库。
伤口的愈合：在伤口愈合过程中，皮肤干细胞被激活，分化为皮肤纤维细胞和其他细胞类型，形成新的真皮组织。
衰老：随着年龄的增长，皮肤纤维细胞的活性降低，导致胶原蛋白和弹性蛋白的产生减少，从而导致皮肤松弛和皱纹。干细胞的衰老也影响了皮肤的再生能力。
调节机制TGFβ：转化生长因子β (TGFβ) 是促进皮肤纤维细胞分化的关键调节剂。
PDGF：血小板衍生生长因子 (PDGF) 调节皮肤纤维细胞的增殖和迁移。
FGF：成纤维细胞生长因子 (FGF) 刺激皮肤纤维细胞的胶原蛋白合成。
Wnt信号通路：Wnt信号通路参与皮肤干细胞的维持和分化。
临床意义了解皮肤纤维细胞和干细胞之间的关系对于开发治疗皮肤老化、伤口愈合和皮肤疾病的新疗法至关重要。例如：
刺激干细胞分化为皮肤纤维细胞可以增强伤口的愈合。
靶向皮肤纤维细胞的激活可以改善皮肤的外观和弹性。
调节干细胞库可以延缓皮肤衰老的进程。
4、皮肤纤维细胞与干细胞的区别
皮肤纤维细胞与干细胞的区别
来源和位置
皮肤纤维细胞：来源于皮肤真皮层中的成纤维细胞。
干细胞：存在于皮肤真皮层和表皮层的特定部位，如毛囊和皮脂腺。
分化能力皮肤纤维细胞：分化为成纤维细胞，产生胶原蛋白、弹性蛋白和基质。
干细胞：具有自我更新和分化为多种细胞类型的潜力，包括皮肤细胞（如角质形成细胞、色素细胞和毛囊细胞）。
再生成潜力
皮肤纤维细胞：具有有限的再生能力，因永久性细胞周期退出而衰老。
干细胞：具有高度的再生能力，可以自我更新并产生新的皮肤细胞，用于组织修复和再生。
寿命皮肤纤维细胞：寿命有限，在不断复制后停止分裂。
干细胞：寿命较长，可以自我更新和产生新的细胞，保持组织的稳态。
功能皮肤纤维细胞：提供皮肤的结构和弹性，通过产生胶原蛋白和弹性蛋白。
干细胞：保持皮肤的健康和再生，通过产生新的皮肤细胞来修复损伤和维持组织稳态。
临床意义皮肤纤维细胞：用于组织工程和创伤愈合，因为它可以产生胶原蛋白和基质。
干细胞：被认为具有皮肤再生和修复的巨大治疗潜力，可用于治疗各种皮肤疾病和损伤。
