牙周膜干细胞炎症模型（牙周膜干细胞原代提取）
- 作者: 杨思影
- 来源: 投稿
- 2025-01-17
1、牙周膜干细胞炎症模型
牙周膜干细胞炎症模型
牙周膜干细胞 (PDSC) 是一种多能干细胞，存在于牙周膜中。它们具有分化为成骨细胞、成牙本质细胞和成牙周膜细胞的能力。在牙周炎等炎症性疾病中，PDSC 的功能受损，导致牙周组织破坏。
模型的创建
牙周膜干细胞炎症模型通常通过以下步骤创建：
1. 分离 PDSC： 从健康或患有牙周炎的患者中收集牙周膜组织，并提取 PDSC。
2. 建立单核细胞培养物： 将 PDSC 培养在含有促炎细胞因子（如白细胞介素1β 和肿瘤坏死因子α）的培养基中。
3. 诱导炎症： 促炎细胞因子激活 PDSC，导致它们产生促炎因子并抑制成牙周组织分化。
模型的应用
牙周膜干细胞炎症模型用于研究牙周炎的病理生理机制，包括：
PDSC 功能受损： 该模型允许研究促炎细胞因子如何影响 PDSC 的分化和功能。
炎症介质的产生： 该模型可用于测量 PDSC 在炎症条件下产生的促炎介质，如细胞因子和趋化因子。
新治疗靶点的识别： 通过了解 PDSC 功能受损的机制，该模型可以帮助识别治疗牙周炎的新靶点。
局限性与任何模型一样，牙周膜干细胞炎症模型也有一些局限性，包括：
体外模型： 该模型是建立在体外的，可能无法完全复制体内发生的过程。
细胞异质性： PDSC 群体具有异质性，不同来源的 PDSC 的反应可能不同。
缺乏复杂性： 该模型不包括牙周炎的其他方面，例如菌斑和免疫反应。
结论牙周膜干细胞炎症模型是一个有价值的工具，用于研究牙周炎的病理生理机制。通过了解 PDSC 功能受损的机制，该模型可以帮助识别治疗牙周炎的新靶点。
2、牙周膜干细胞原代提取
牙周膜干细胞原代提取
材料人牙周膜组织（新鲜或冷冻保存）
培养基（无血清）
胶原酶 I、II 和 IV
胰蛋白酶
细胞培养皿
细胞培养液（含血清）
抗生素/抗霉菌剂
流式细胞仪或细胞分类标记物（CD44、CD73、CD90）
步骤1. 牙周膜组织消化：
将新鲜牙周膜组织切成小块或解冻冷冻组织。
将组织碎片转入培养基，加入胶原酶 I、II 和 IV（混合浓度为 1 mg/mL），并在 37°C 孵育 24 小时，不断搅拌。
加入胰蛋白酶（浓度为 0.250.5 mg/mL），继续孵育 3060 分钟，以去除细胞外基质。
2. 细胞过滤和离心：
将消化后的悬液过滤通过 100 μm 细胞滤器，以去除未消化的组织碎片。
用含血清的培养基以 300×g 离心 10 分钟，以去除细胞碎片。
3. 细胞培养：
将离心后的细胞重悬于含血清的培养基中。
将细胞接种到细胞培养皿中，在 37°C、5% CO2 下培养。
每 23 天更换一次培养基。
4. 细胞扩增和鉴定：
培养 12 周后，细胞将贴壁生长并扩增。
使用流式细胞仪或细胞分类标记物对细胞进行鉴定，以确认其为牙周膜干细胞（通常表达 CD44、CD73 和 CD90）。
提示使用新鲜的牙周膜组织可获得更好的成活率。
消化时间和酶浓度应根据组织类型进行优化。
培养基应无血清，以防止成纤维细胞增殖。
培养期间定期监测细胞形态和贴壁性。
3、牙周膜干细胞提取方法
牙周膜干细胞提取方法
材料牙周手术器械
无菌培养基
酶溶液（如胶原酶和胰蛋白酶）
培养瓶或培养板
步骤1. 手术取样
在局部麻醉下，切开牙龈组织，显露出牙根表面。
使用牙周洁刮器轻轻刮取牙周膜组织。
2. 组织消化
将刮取的组织放入含有酶溶液的培养基中。
将其置于 37°C 的培养箱中孵育 6090 分钟，以消化细胞外基质。
3. 过滤和离心
将消化后的组织通过 70 微米的滤器过滤，去除残留的结缔组织和细胞碎片。
将滤液离心 5 分钟，1000rpm。
4. 细胞培养
将离心后的细胞重悬于培养基中，接种到培养瓶或培养板中。
将细胞培养在 37°C 的培养箱中，5% CO2 条件下。
5. 细胞增殖和富集
在培养过程中，干细胞将增殖并富集。
培养基通常每 23 天更换一次。
6. 鉴定干细胞
使用流式细胞术或免疫细胞化学方法鉴定干细胞，检测牙周膜干细胞特异性标志物（如 STRO1、CD146）。
提示使用无菌技术进行整个过程。
使用高品质的培养基和酶溶液以优化细胞的存活率。
优化酶消化时间以获得最佳的细胞释放率，同时避免过度消化。
使用适当的培养条件来促进牙周膜干细胞的增殖和分化。
4、牙周膜干细胞原代培养
牙周膜干细胞原代培养
简介：牙周膜干细胞（PDLSCs）是从牙周膜组织中分离和培养的干细胞。它们具有生成骨骼、牙本质和牙龈组织的潜能。PDLSCs 的原代培养是指将 PDLSCs 从组织中分离并建立培养体系的过程。
材料：牙周膜组织
培养基（含抗生素和生长因子）
培养板或培养瓶
无菌器材
步骤：1. 组织收集：在无菌条件下，从健康供体中收集牙周膜组织。
2. 组织消化：将组织切成小块并用胶原酶消化，以释放 PDLSCs。
3. 分离：将消化后的混合物通过细胞滤网过滤，去除未消化的组织碎片。
4. 培养：将滤液接种到含有生长因子的培养基中，并保持在 37°C 和 5% CO2 的环境中。
5. 克隆形成：培养 714 天后，增殖的细胞会形成克隆。
6. 克隆选择：选择形态学上均匀的克隆，并转移到新的培养板中。
培养条件：
培养基：含生长因子（如 EGF、FGF2）、抗生素和抗真菌剂的 DMEM 或 αMEM 培养基。
温度：37°C
CO2 浓度：5%
培养基更换：每 23 天更换培养基。
特征鉴定：
培养的 PDLSCs 应表现出以下特征：
形态：梭形或星形
表面标记：CD73、CD90、CD105 阳性；CD34、CD45 阴性
分化潜能：能够分化为牙周膜细胞（成纤维细胞、成骨细胞、成牙本质细胞）
应用：PDLSCs 的原代培养在牙周再生、骨再生和组织工程等应用中具有潜力。
