干细胞微球体实验步骤（干细胞 🐋 微球体实验步骤视频）
- 作者: 郭谨川
- 来源: 投稿
- 2025-02-23
1、干细胞微球体实 🦍 验步 🐒 骤
干细胞 🕸 微球体实验步骤
材料：干 🦈 细 🦍 胞 🦊 培养物
悬浮培养基 🐶 （含生长因子）
培养 🌾 板 🐡 或悬浮培养瓶
摇 🦅 床或 🐬 培养箱
步骤：1. 细胞准 🐳 备 🌲 ：
收集处于对数生长期阶段 🦋 的干细 🦄 胞。
洗涤细胞 🐦 并将其悬浮在无 🦢 血清的悬浮培养基中 🐦 。
2. 微球 🌸 体 🍀 形 ☘ 成：
将悬浮的细胞 🐠 接种至培养板或悬浮 🐎 培养瓶中。
按 🌷 细胞 🕷 密度（通常为 个细胞 🌺 /mL）接种。
轻柔摇晃培养物或将其置于培养箱中 🐼 旋转培养。
3. 微球体 🦁 培 🌷 养 🕊 ：
培养 37 天，或 🌼 直至 🕊 形成紧密的微球体。
根据需要更换培养 🐟 基。
监测微球体的大小和形 🐳 态。
4. 微球 🐒 体收集：
使 🐕 用 🌾 移液管轻柔吸取微球体。
将微球体转移至 🐠 新的培养板或悬浮培养瓶中。
5. 微 🐘 球体分 🐛 析：
通过显微镜观察 🦄 微球体的大小、形状和细胞 🐅 分布。
进 🕷 行流式细 🌷 胞术以分析微球 🐶 体的细胞表面标记物。
进行 RNA 测序或 🦈 微阵列分析以研究微球体的基因表达谱 🐎 。
培 🌷 养条件优化 🐘 技巧：
培养基：优化生长因 🦢 子、底物和血清 🐋 浓度。
悬浮培 🌷 养：调整摇床速度或旋转培养 🦅 装置。
接种 🐛 密度：寻找 🕸 形成均匀微球体的最佳细胞密度。
培养时 🌼 间：根据目标应 🦄 用 🌲 确定最佳培养时间。
注 🦉 意 🐒 事项 🐡 ：
细胞状态和培养条件会 🐒 影 🐋 响微球体形 🌻 成。
避免过度 🐡 震荡 🐞 或 💐 摇晃，因为它会破坏微球体。
微球 🐈 体的大小和形态可能会因干细胞类型和培养条件而异。
2、干细胞微球体实验 🐧 步骤视 🌳 频
干细 🌾 胞微球体实验步骤 🐦 视频
材料：干 🐎 细胞培 🐠 养 🦁 基
培养皿移液管
培养板
旋涡 🌻 振 🦅 荡 💐 器
步骤：1. 铺板：在培养皿 🐬 中加入干细胞培养基，将其铺满底 🐠 部。
2. 单细 🦋 胞悬液：收集 💮 干 🦄 细胞并制备成单细胞悬液。
3. 加入悬液：将单细胞悬液加 🌷 入铺板的培养皿中。
4. 振荡：使用旋涡振荡器以低速轻柔振荡培养皿使，细 🐴 胞分散均匀。
5. 倾倒：将培养皿倾倒，小心地去除悬 🦍 浮的 🐯 液体 🐒 。
6. 更换培养基：向培养皿中加入新鲜 🦋 的干细胞培养 🐼 基。
7. 培养：将培养皿置于培养箱 🌹 中 🐟 培养，天 23 或直至形成微球体。
8. 观察：使用 🌸 显微镜观察微球 🦈 体的形成 🍁 和生长情况。
提示：使用新鲜的干细胞，避免使用 🦋 冷冻复苏的细胞。
确 🌳 保培养基无菌 🐠 。
振荡时，避免产 🦢 生 🌳 气泡。
定期更换培 🌿 养基以维 🦟 持细胞的健 🕸 康生长。
微 🌻 球体的形成时间可能因 🐯 细胞类型而异。
视频 🐒 链接 🕸 ：
[干细胞微 🦊 球 🪴 体实验步骤视频]()
3、干细 🦍 胞微球体实验步骤图
干细 🦅 胞 🌻 微球体实验步骤图
材料：干细胞 🍀 系 🐝
培 🌺 养基和 🐋 添加剂 🐶
超低附着 🐅 培养板 🌵
移 🌷 液枪和吸头
显微镜离心机
步骤：
1. 培 🐦 养 🪴 干 🌷 细胞
在培养基 💮 中培养干细胞至对数生长期。
2. 制 🐺 备悬液 🐎
用 TrypLE 或 💮 Accutase 从细胞培养物中 🐅 解离干 🐘 细胞。
用含 10% FBS 的 🌴 培养 🦢 基洗涤细 🦟 胞。
将细胞重 🐦 悬于含 10% FBS 的培 🐛 养基中，达到 25 x 10^5 个细胞/mL。
3. 设置超低附 🐘 着培养板
将超低 🐕 附着培养板预热至 37°C。
4. 添加细 🦟 胞悬液
每孔 🦄 加入 12 mL 细胞悬液。
轻柔地摇晃培养板 🐡 ，以均匀分布细 🦈 胞。
5. 培 🦟 养 🐞
将 🐡 培养板置 🦁 于培养 37°C、5% CO2 箱中 🌿 培养。
每 23 天更换培 💮 养基。
6. 形 🐕 成微 🪴 球体
培养 37 天，细胞将聚集 🌷 并形 🦊 成 🐺 三维微球体。
7. 微球体培养和收集 🌵
轻 🕊 轻移液去除培养 🌼 基。
用含 10% FBS 的 🐧 培养基洗涤微球体。
使用 🪴 移液枪收集微球体，或将培养基移入离心管中离心收集。
8. 观 🌹 察和分 🐧 析
使用显微镜观察微球体的形态和 🦄 大小。
进行其他分析，例，如免疫荧光染色或流式细 🐠 胞术以表征 🪴 微球体的特性 🌼 。
提示：使用具有 🐼 低剪切力的移液枪 🐒 ，以防止损坏微球体 🐡 。
保持培养基无菌 ☘ ，以 🐎 避 🐺 免污染。
优化培养条件，例，如细胞密度和培养时间 💮 以获得所需的微球体大小和形态。
4、肿瘤干细胞微 🐡 球培养
肿瘤干细 🌵 胞微球培养
简介肿瘤干细胞 🌴 (CSC) 是肿瘤中具有自我更新能力和致瘤能力的一类细胞。CSC 微球培养是一种体外培养的 CSC 方法，可 CSC 以用于研究的生物学特性致瘤、潜能和。药物敏感 🐵 性
方法1. 肿瘤组织采集：从 🐶 患者或动物模型中 🦢 采集肿瘤组织。
2. 酶解：使用胶原酶和其他 🐟 酶将组 🌼 织解离成单细胞悬液。
3. 表面标记：使用 CSC 特异性表面标记（例如 CD44、CD133 或 ALDH）对细胞进行免疫磁珠分选 🐎 或 🐱 流式细胞术分选 🪴 。
4. 微球培 🌺 养：将培养 CSC 在含有生长因子、细胞 🦟 因子和其他培养 ☘ 基成分的低粘着性微球之上。
5. 形成微球：细胞会附着在微球表面并 🦆 形成三维球体结构。
6. 培养和扩增：微球培养在非粘着培养皿中进行，并 🦋 定期 🐳 添加新鲜培养基以促进 CSC 的扩增。
优点保持 CSC 的干性特征和 🌺 致瘤 🌹 潜能
提供三维培养环境，模 🦆 拟肿 🌴 瘤微环 🦅 境
允许长期培养 🐶 和扩增 CSC
方便进行各种实验，例 🌿 如分化、致瘤性和药物敏感性检测
应用研究 CSC 的生物学特性和致瘤 🌺 机 🐱 制
开发靶向 CSC 的新型 🐳 疗法 🐛
评估抗癌药物对 🐡 CSC 的 🐛 疗效
构建患者特异性 CSC 模型 🐬 用于个体化治疗
筛选 🌾 和鉴定 CSC 抑 🌷 制剂
注意事项CSC 微球培养需要特定 🌺 的培养条件和技术。
CSC 培 CSC 养 🐱 可能会选择性 🐬 地富集某些亚 🐞 群。
微球培养 🐱 的环境可能影响的 🪴 CSC 特性和致瘤潜能。
