🕸 大鼠骨髓充质干细胞（大鼠骨髓间充质干细胞流式鉴定）
- 作者: 马毅霖
- 来源: 投稿
- 2025-03-03
1、大鼠骨 🍁 髓充质 🌾 干细胞
定义大鼠骨髓充质干细胞（bMSCs）是存 🦢 在于大鼠骨髓基质中的多能干细胞。
特性多能 🐈 性：bMSCs具有分化为多种细胞 🐞 类型的潜力，包括骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞和神经细胞。
自我更新：bMSCs可以自我更新，即 🕊 在体外培养条件下增殖并保持它们的干 🌵 细胞特性。
免疫调节：bMSCs具有免疫调节特性，可以抑制免疫反应并促 🦈 进组织修复。
归巢 🌾 性：bMSCs表现出归 🌷 巢性，即迁移到损伤或炎症部位的能 💐 力。
来源 🦈 和 🐎 分 🌾 离
bMSCs通 🦄 常 🐼 从大鼠 🕸 股骨或胫骨骨髓中分离分离。过程涉及：
1. 分离 🐈 骨髓 🦅
2. 红细胞裂解 🐦
3. 单核细胞分离 🕸
4. 培养在含有特 🌼 定生长因子的培养基中
应用bMSCs在再 🐼 生医学和疾病治疗中具有广泛的应用，包括：
骨组织工程：修复骨缺 ☘ 损和促进骨再生。
软骨组 🕊 织工程：治疗关节炎和软骨损 🌿 伤。
脂肪组织工程：重 🐞 建 🍁 软 🐠 组织缺损。
神经组织工程：修 🌺 复脑损 🐴 伤和脊髓损 🌲 伤。
免疫调 🐈 节：治疗自身免疫性疾病 🌺 和移植物抗宿主病。
研究价值bMSCs是干细 🐵 胞 🐯 研究的宝贵模型，可用于研究：
干细胞分化和自 🐘 我更新 💐 的机制 🦊
干细胞与 🐈 微环境之间的 🐞 相互作用
干细 🐵 胞 🐅 在组 🐵 织修复和再生中的作用
2、大鼠骨髓间充质 🌴 干细胞流式鉴定
大鼠骨髓间 🌷 充质干细 🌻 胞流式鉴定的步骤 🐳 ：
1. 样 🦆 品准备
收集 🐎 大 💐 鼠骨髓 🦊 ，用 PBS 冲洗并离心取上清。
用红细胞裂解缓冲液裂解红 🦄 细胞。
用 PBS 洗涤细胞并 🐼 离心收集沉淀。
2. 细 🐴 胞 🐈 标记 🍀
将细胞重悬于 PBS，加入以下抗 🦋 体 🐅 ：
CD73PE
CD90FITC
CD45APC
孵育 30 分钟 🌹 ，避光。
3. 洗 🌹 涤 🐶
用 🌹 PBS 洗 🐼 涤细胞并离心收 🐞 集沉淀。
4. 流 🐎 式 🌵 细胞术 🦈 分析
将标记后的细胞重悬于 PBS，使 🕷 用流式 🦄 细胞仪分析。
根据 CD73、CD90 和 CD45 的表 🪴 达，鉴定间充质干细胞群。
鉴 💐 定标 💮 准：
间充质 🐯 干细胞 🐘 群：CD73?、CD90?、CD45?
阴性 🐯 对照：未标记 🌷 的细胞或同型对照抗体标记 🐘 的细胞
流 🐝 式 🌲 鉴定门控策略 🦅 ：
1. 根据散射图鉴定细 🌸 胞群体（前向散射 vs. 侧向散射 🦄 ）。
2. 根据荧光补偿设置，将 🐕 荧光通道校正。
3. 创建门控，排除 🪴 细胞碎片、双重标 🦊 记和非特异性 🌳 结合。
4. 确定大鼠骨髓间 🦉 充质干细胞群 🌼 ，即 🌷 ：CD73?、CD90?、CD45?。
3、大鼠骨 🐳 髓间充质干细胞形态图
[大鼠骨髓间 🐠 充质干细胞形态图]
形 🌷 态特 🐵 征：
纺锤形 🍀 或多角 🐎 形细胞
具有 🌾 多核细 🌷 胞 🦉 形态
细胞 ☘ 体大小和形状异质 🐯 性
细胞表面光滑，无明显绒毛 🌻 状结构
细胞核 💮 较大 🐵 ，呈椭圆形或卵圆形
核仁清晰 ☘ 可见 🕸
胞浆 🦢 丰富，呈现 🍀 丝状或网状结构
含有丰 🐼 富的 🐼 线粒体、内质网和高尔基体等细胞器 🌿
4、大鼠 🐦 骨髓间充质干细胞培养基
大 🐳 鼠骨髓间充 🐴 质 🐺 干细胞培养基
组成：Dulbecco's改良Eagle培 🐳 养 🕸 基 (DMEM)
10% 胎牛血清 🐡 (FBS)
100 U/mL 青霉 💐 素
100 μg/mL 链霉素 🦆
4 mM L谷氨酰胺 🪴
2 ng/mL 碱性 🪴 成纤维细 🌴 胞生长因子 (bFGF)
说明：FBS 可以根据实验需要 🐎 进行调整，范围为 🍀 520%。
bFGF 可促进间充质 🌹 干细胞增殖。
培养基 💮 应存放在 4°C 并避光。
使 🍀 用 🍀 前将培养基加热至 37°C。
使用 🦉 前将培养基过滤灭菌 🐋 。
制 🦊 备 🐝 方法：
1. 在无菌条 🍀 件 🐞 下 🪴 ，将以下组分混合到无血清培养基中：
DMEM
L谷 🌷 氨酰 🌾 胺 🐯
青霉素 🌺
链 🐈 霉素 🌵
2. 加入 FBS 并充分混合 🐵 。
3. 加入 bFGF 并 🌴 轻轻涡 🐦 旋。
4. 过滤培养基以 🦅 去除任何沉淀物或污染物。
5. 将培养基储 🐦 存 🐘 在 4°C 并 💐 避光。
注意：培养基应根 🐦 据具体实 🦟 验进行调整，以优化干细胞生长和分化。
培养基应定期更换，以维持细胞活力和防 🐡 止污染。
始终 🐛 使用无菌技术进行培养。
