获取小鸡胚胎干细胞（小鸡胚胎是在哪里成长发育的）

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4、获取小鸡胚胎干细胞的方法

获取小鸡胚胎干细胞的方法

受精鸡卵（46 日龄）

无菌操作台

无菌器皿（培养皿、移液管、吸管）

无血清培养基（如 DMEM/F12）

胰酶溶液

胶原酶溶液

1. 消毒卵壳：用 70% 酒精擦拭卵壳，去除表面污染。

2. 打开卵壳：在卵壳的钝端创建一个约 2 cm 的孔。小心不要损坏胚胎。

3. 取出胚胎：用无菌镊子小心地取出胚胎并将其转移到无菌培养皿中。

4. 分离胚盘：使用无菌手术刀或镊子，将胚盘从外胚层和羊膜层分离。胚盘是一块扁平的圆形区域，由几个胚胎外胚层细胞层组成。

5. 消化胚盘：用胰酶溶液处理胚盘 2030 分钟，以分解细胞外基质。然后用胶原酶溶液再处理 510 分钟。

6. 机械解离：用火焰封口的移液管轻轻吹打细胞团，将其解离成单个细胞。

7. 收集细胞：使用无血清培养基冲洗细胞并收集到无菌离心管中。

8. 离心和重悬：将细胞在 300 x g 的速度下离心 5 分钟。小心地去除上清液并用无血清培养基重悬细胞。

9. 培养：将细胞转移到预先涂有胶原的培养皿中，并在 37°C、5% CO2 的条件下培养。

10. 过夜后换液：过夜后，更换培养基，去除未黏附的细胞。

使用无菌技术至关重要，以防止污染。

培养基应补充生长因子（如纤维母细胞生长因子和表皮生长因子）以支持小鸡胚胎干细胞的生长。

小鸡胚胎干细胞通常在 35 天内形成聚集体（称为胚体），可以进一步传代培养。