人牙周膜干细胞培养（牙周膜干细胞培养原代与传代培养基差别）
- 作者: 胡苡澄
- 来源: 投稿
- 2024-12-11
1、人牙周膜干细胞培养
人牙周膜干细胞培养
人牙周膜干细胞（hPDLCs）是具有自我更新和多向分化潜能的多能干细胞。它们存在于牙周膜组织中，负责牙周组织的维持和再生。hPDLCs的培养对于研究牙周疾病、组织工程和再生医学具有重要意义。
材料：新鲜拔出的健康人牙
无血清培养基：DMEM/F12、αMEM 或 DMEM 高糖
血清：1020% 胎牛血清 (FBS)
抗生素：青霉素/链霉素或庆大霉素
真菌抑制剂：两性霉素 B
细胞因子：表皮生长因子 (EGF)、成纤维细胞生长因子 (FGF) 可选
方法：1. 组织收集：
将健康人牙拔出后，用无菌生理盐水冲洗。
用无菌手术刀从牙根上刮除牙周膜组织。
2. 组织消化：
将组织切成小块并放在含有胶原酶和透明质酸酶的消化液中。
在 37°C 孵育 12 小时，每隔 30 分钟搅拌一次。
3. 细胞分离：
消化完成后，通过 70 μm 细胞滤网过滤细胞悬液。
对细胞进行离心并用无血清培养基重悬。
4. 培养：
将细胞播种在预涂有粘连因子的培养皿中。
加入无血清培养基，并补充 1020% FBS、抗生素和真菌抑制剂。
每 34 天更换培养基。
5. 细胞鉴定：
通过免疫表型分析或流式细胞术检测 hPDLCs 的表面标记，例如 CD44、CD73、CD105、CD90 和 CD31。
诱导分化为成纤维细胞、骨细胞或脂肪细胞等多种谱系，以验证多向分化能力。
优化条件：
血清浓度：1020% FBS 的浓度支持良好的细胞增殖和存活。
生长因子：EGF 和 FGF 可促进 hPDLCs 的增殖和分化。
培养基组成：DMEM/F12 或 αMEM 培养基适用于 hPDLCs。
培养环境：37°C、5% CO2 的潮湿环境。
应用：牙周组织工程和再生
牙周疾病的研究
骨组织工程
抗衰老研究
参考文献：
Seo BM, Miura M, Gronthos S, Bartold PM. Investigation of the Growth Potential of Periodontal Ligament Cells in Culture. J Periodontol. 2004;75(11):.
Wang L, Zhao P, Huang W, et al. Culture of periodontal ligament stem cells and their differentiation into adipocytes. J Cell Biochem. 2010;110(4):862869.
2、牙周膜干细胞培养原代与传代培养基差别
原代培养基
定义：直接从组织中分离出的干细胞培养基，不经过任何传代。
细胞来源：新鲜的牙周膜组织。
特征：含有异质性的细胞群体，包括干细胞、前体细胞和成熟细胞。
细胞生长缓慢，增殖能力受限。
可保持其原始的细胞特性和功能。
传代培养基
定义：从原代培养基中获得的干细胞培养基，经过多次传代以扩增细胞数量。
细胞来源：原代培养基。
特征：细胞群体更均一，主要包含干细胞或前体细胞。
细胞生长较快，增殖能力较强。
可能逐渐失去原始的细胞特性和功能，但仍保留一定的干细胞分化潜能。
差别| 特征 | 原代培养基 | 传代培养基 |
||||| 细胞来源 | 新鲜组织 | 原代培养基 |
| 细胞异质性 | 异质性 | 相对均一 |
| 细胞生长速率 | 缓慢 | 较快 |
| 增殖能力 | 受限 | 较强 |
| 原始细胞特性 | 保持原始特性 | 可能部分丧失 |
| 应用 | 探索干细胞的生物学特性、用于再生治疗的候选细胞 | 扩大细胞数量、更广泛的应用 |
原代培养基可用于研究牙周膜干细胞的原始特性，而传代培养基则更适合大规模细胞扩增和更广泛的应用。两类培养基之间的选择取决于具体的研究或治疗目的。
3、人牙周膜干细胞培养基是什么
人牙周膜干细胞培养基是一种用于培养和维持人牙周膜干细胞活力的液体培养基。其成分通常包括：
基础培养基：如 Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) 或 α最小必需培养基 (αMEM)
血清：如胎牛血清 (FBS) 或人血清 (HS)，提供生长因子和激素
生长因子：如上皮生长因子 (EGF)、成纤维细胞生长因子 (FGF) 和胰岛素样生长因子 (IGF)，促进细胞增殖和分化
抗生素：如青霉素和链霉素，防止细菌污染
其他添加剂：如海藻酸钠、明胶或聚乙烯吡咯烷酮 (PVP)，提供细胞粘附基质
4、人牙周膜干细胞培养基有哪些
人牙周膜干细胞培养基通常包含以下成分：
基础培养基：通常为 Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) 或 Ham's F12。
血清：通常为胎牛血清 (FBS)，浓度为 1020%。
生长因子：刺激细胞增殖和分化的生长因子，例如：
表皮生长因子 (EGF)
成纤维细胞生长因子 (FGF)
血小板衍生生长因子 (PDGF)
抗生素：防止细菌污染，例如青霉素、链霉素或头孢菌素。
抗真菌剂：防止真菌污染，例如安非特里辛 B。
补充剂：提供细胞增殖必需的营养成分，例如非必需氨基酸、谷氨酰胺和胰岛素转铁蛋白硒预混合物。
其他可能添加到培养基中的成分包括：
维生素：例如抗坏血酸和维生素 C。
激素：例如皮质醇。
重組蛋白：例如骨形态发生蛋白 (BMP)。
小分子：例如香豆素或乙基咔巴肼。
培养基的具体组成取决于所培养的特定牙周膜干细胞类型。
