老鼠胚胎干细胞培育（小鼠胚胎干细胞可以来自囊胚中的）
- 作者: 陈苡朵
- 来源: 投稿
- 2024-12-11
1、老鼠胚胎干细胞培育
老鼠胚胎干细胞培育
胚胎干细胞（Embryonic stem cells，ESCs）是来自囊胚中胚盘的内细胞团的多能干细胞。它们具有自我更新和分化为所有胚层细胞（外胚层、中胚层和内胚层）的能力。
老鼠胚胎干细胞的培育方法
1. 囊胚采集
雌性小鼠受精后 3.5 天（囊胚期）进行输卵管冲洗。
采集的囊胚在含血清的培养基中培养过夜。
2. 内细胞团分离
从囊胚中去除滋养层，留下内细胞团（ICM）。
ICM 被置于含LIF (白细胞抑制因子) 的培养基中，以维持干细胞性状。
3. 原代培养
将 ICM 在含 LIF 和其他生长因子的培养基中培养 710 天。
培养物形成小而致密的 ESCs 聚集体。
4. 传代培养
每 34 天，使用不含 LIF 的培养基将 ESCs 聚集体传代并分成更小的聚集体。
继续培养，ESCs 将保持其多能性。
培养条件培养基：含 LIF、血清和生长因子的无血清培养基
培养皿：含明胶的培养皿
温度：37°C
二氧化碳浓度：5%
应用老鼠胚胎干细胞广泛用于生物医学研究，包括：
研究发育生物学、干细胞生物学和再生医学
药物筛选和毒性测试
疾病建模
组织工程和修复
优点具有自我更新和多能分化的能力。
可以根据需要分化为特定的细胞类型。
为研究人类疾病和开发治疗方法提供了一个有价值的模型。
2、小鼠胚胎干细胞可以来自囊胚中的
内细胞团（ICM）
3、小鼠胚胎干细胞最早于多少年获得
1981年
4、老鼠胚胎干细胞培育过程
材料和设备：
小鼠受精卵
无血清培养基
纤维母细胞喂养层
培养皿培养箱
程序：
1. 受精卵的收集
从雌性小鼠中取出受精卵。
将受精卵转移到无血清培养基中。
2. 内细胞块的分离
让胚胎发育成囊胚（包含内细胞块和滋养层）。
机械或酶解方法去除滋养层。
收集内细胞块。
3. 培养内细胞块
将内细胞块转移到纤维母细胞喂养层上。
在富含生长因子的培养基中培养。
培养基中通常含有 LIF（白细胞抑制因子）和 bFGF（碱性成纤维细胞生长因子）。
4. 干细胞集落的形成
内细胞块细胞会增殖形成圆顶状的干细胞集落。
这些集落被称为胚胎干细胞（ESCs）。
5. ESCs 的分离和扩增
使用胰蛋白酶或其他酶消化法分离干细胞集落。
将分离的细胞转移到新的培养皿中，并以新鲜培养基继续培养。
ESCs 可以无限增殖并保持它们的未分化状态。
6. 诱导分化
为了将 ESCs 分化成特定类型的细胞，可以添加诱导因子或改变培养条件。
ESCs 具有分化为多种细胞类型，包括神经元、心肌细胞和内皮细胞的潜力。
注意事项：
ESCs 的培养需要严格的无菌技术。
培养条件（如培养基组成、温度）需要仔细控制。
ESCs 的分化是一个复杂的过程，需要对诱导因子和时间点的优化。
