胚胎神经干细胞分离（神经干细胞分离纯化方法）
- 作者: 王绾柚
- 来源: 投稿
- 2024-12-11
1、胚胎神经干细胞分离
胚胎神经干细胞的分离
胚胎神经干细胞 (ESC) 是存在于早期胚胎中的未分化细胞，具有分化为中枢神经系统所有细胞类型的潜力。从胚胎中分离 ESC 是神经科学和再生医学研究中的一项基本技术。
方法：1. 获取胚胎：
从受精卵或体外受精 (IVF) 诊所获取早期人类胚胎。
从动物模型（例如小鼠或斑马鱼）中获取胚胎。
2. 去除滋养层：
用蛋白酶或其他酶去除保护胚胎内细胞团的滋养层细胞。
3. 分离内细胞团 (ICM)：
将胚胎分割成两部分：内细胞团（将形成胚胎）和滋养层（将形成胎盘）。
4. 培养 ICM：
将 ICM 放入含有特定生长因子的培养基中，促进 ESC 的增殖。
5. 筛选 ESC：
使用免疫细胞化学或流式细胞术筛选表达特定 ESC 标志物的细胞，例如 SSEA4、Oct4 和 Nanog。
注意事项：
从人类胚胎中分离 ESC 受到伦理审查和法规的严格控制。
ESC 的培养需要高度受控的环境和专门的培养基。
从胚胎中分离 ESC 的成功率可能因物种、胚胎发育阶段和所用技术而异。
应用：分离出的 ESC 可以用于各种研究和治疗应用，包括：
神经发育和疾病的研究
神经再生和修复
新药物和疗法的测试
个性化医疗和疾病建模
2、神经干细胞分离纯化方法
神经干细胞分离纯化方法
1. 免疫磁珠分离
使用带有抗神经干细胞标记物（如 CD133、nestin）抗体的磁珠。
将细胞悬液与磁珠孵育，带有标记物的细胞将被磁珠捕获。
通过磁场分离出捕获的细胞。
2. 流式细胞分选（FACS）
使用荧光抗体标记神经干细胞标记物。
将细胞悬液通过 FACS 机器，根据荧光强度分离出带有标记物的细胞。
3. 中枢神经系统（CNS）组织培养
将 CNS 组织解离并培养。
神经干细胞在培养基中会形成神经球。
通过机械或酶解方法从神经球中分离出神经干细胞。
4. 细胞表面标记识别
使用特定抗体识别神经干细胞表面的标志物，如 A2B5 或 PSANCAM。
通过抗体结合和二次检测进行分离。
5. 转基因筛选
将表达神经干细胞特定基因（如 nestin）的报告基因转入细胞。
通过选择报告基因的表达来分离神经干细胞。
6. 差异培养
将细胞培养在神经干细胞诱导培养基中。
神经干细胞会在培养基中保持未分化的状态，而其他细胞类型会分化。
通过移除分化的细胞或选择性标记来分离神经干细胞。
7. 微流控芯片
利用微流控芯片中的特定通道和梯度，根据细胞大小、电荷或其他特性分离神经干细胞。
8. 干细胞培养基补充物
在细胞培养基中添加神经干细胞生长因子（如 EGF、bFGF），以促进神经干细胞的生长和存活。
9. 酶解分离
使用胰蛋白酶或其他酶解酶将神经干细胞从培养基质或其他细胞中分离出来。
10. 生物素标记拉取
使用生物素标记的神经干细胞抗体。
将细胞与链霉亲和素磁珠孵育，捕获带有标记物的细胞。
通过生物素链霉亲和素结合进行分离。
