人成纤维干 🐟 细胞离心（人皮肤表皮干细胞及成纤维细胞的分离培养）
- 作者: 王南卿
- 来源: 投稿
- 2025-02-16
1、人成纤维 🐅 干细胞离心
人成纤维干细胞离 🐕 心
定义人成纤维干细 🦆 胞离心是一种实验室技术，通过离心去除培养基 🌹 中的细胞沉淀物。这有助于去除死细胞细胞、碎，片。和其他培养基中的杂质从而净化细胞培养物
原理离心利用离心力将细胞和杂质按 🐎 密度分层。在 🐯 离心过程中，较，重。的细胞沉淀在离心管的底部而较轻的杂质浮在培养基的顶部
步骤1. 收获细胞：将培 🌲 养基从细胞培养 🐛 瓶中收集到离心管中。
2. 离心：将离心管放入离 🐒 心机中，通常以 300500 x g 的速 🐡 度离心 510 分钟。
3. 移液：小心地 🌹 移液并去 🕊 除上清液（培养基）。
4. 再悬浮细胞：在新鲜的培养基中再 🦅 悬浮细胞沉淀物。
优点去除 🦟 死细胞和 🐕 杂 🌼 质
纯化 🌾 细 🌲 胞培养物
集 🦋 中 🦊 细胞 🐎
准备用于进一步的研究或应用（例如，组织 🐎 工程或再生医学）
注意事项选择适当的离心速 🐈 度和时间，避免损坏 💐 细胞 🌵 。
使用无菌技术以防止污染 🐋 。
处理细胞时要小 🐎 心，以免造成细胞损伤或坏死。
优化离心条件 🌻 以最大 🦆 限度地提高 🌵 细胞活力和回收率。
2、人皮肤表皮 🐕 干细 🌲 胞及成纤维细胞的分离培养
人皮肤表皮干细 🍁 胞及成纤维细胞的分离培养
材 💐 料和 🐬 试 🌳 剂
新鲜人皮肤 🦉 组 🐅 织
Dulbecco's改 🍁 良 🌼 Eagle培养 🐎 基（DMEM）
胎牛 🕷 血 ☘ 清 🐯 （FBS）
上皮细胞 🐟 生长因 🐕 子 🌼 （EGF）
双重抗生 🌵 素（青霉素链霉素）
胶 💮 原酶 🐧 IV
弹性蛋 🐅 白酶
胰 🍀 蛋白酶
培养皿培养瓶
细 🐺 胞分离器
显微镜分离方法
1. 皮肤组织收 🐛 集
从 🐒 健康捐献者处获得新鲜的皮肤组织，面积约为 🌳 2x2厘米 🐺 。
用生理盐水冲洗 🌳 组 🦟 织以去除血液和杂 🐱 质。
将组织转移到无菌培养皿 🐎 中。
2. 分 🐦 离表皮层
使用手术刀小 🌾 心地从真皮层剥离表 🐡 皮层。
将分离 🦆 的表皮组织 🐵 切成小块。
3. 消化表皮组织 🍀
将表皮组织转移 🐴 到含有胶原酶IV和弹性蛋白酶的培养 🐦 基中。
在37℃孵 🐠 育12小时，或直到表皮 🦅 组 🌺 织完全解离成单个细胞。
4. 离 🦟 心和细 🐅 胞分离 🕸
将消化后的组织转 🐡 移到离心管中，在离心1200 rpm分5钟。
去除上清 🌷 液 🐠 ，并用DMEM+10%FBS重悬 🐟 细胞。
使用细胞 🌺 分离器将细胞过 🌼 滤到新的培养皿中以 🐞 去除组织碎片。
5. 成纤维细胞 ☘ 的分离
将表皮细胞上清转移到单独的培养 🌸 皿中 🌲 。
在 🐬 37℃培养23天，让成纤维细胞贴附到 🌹 培养 🦅 皿底部。
去除上清 🦄 液，用，胰 🐝 蛋白酶消化成纤维细 🐞 胞并转移到新的培养瓶中。
培养条件表 🦄 皮干细 🌻 胞：DMEM+10%FBS+EGF（10 ng/mL）
成纤 🐛 维细胞 🐳 ：DMEM+10%FBS
培养环境37℃
5% CO2培 🌿 养 🌿 箱
细胞鉴定表皮干细胞：CK14阳性阳 🐞 性阳性，CK10，CD44
成纤维 🐼 细胞：vimentin阳性阳性，SMA
3、人成 🦆 纤维细胞可以培养多少 🦁 代
人成纤维细胞在体外培养的代数取决于培养 🐒 条件和细胞 🐼 系本身。通常人成纤维细胞，可以在以下代数 💮 范围内培养：
早衰 🌹 （replicative senescence）：约 5080 代
永 ☘ 生化（immortalization）：经基因 🐡 操作或 spontaneous immortalization（自）发永生化延长了分裂能力，可培养数百直至数 🐝 千代
尚未永生化 🌺 的人成纤 🦋 维细胞的代 🌷 数限制：
海夫利克极限（Hayflick limit）：正常人成 🦆 纤维细胞在体外培养中表现出的分裂次数 🐠 上限，约为 5080 代。达，到。此极限后细胞将停止分裂并进入衰老状态
端粒缩短：随着 🐠 细胞分裂，染色体末端的端粒会缩 🦢 短。当端粒缩 🌵 短，到。临界长度时细胞将停止分裂并进入衰老状态
永生化人 🐋 成 🌷 纤维 🐒 细胞的代数扩展：
基因操作：利用转染或病毒介导 🍀 的基因转移，将编码永生因子（如大 💐 T抗原的基因导）入细胞。
自发永生化：一些人成纤维细胞株会自发永生化，原，因尚不完全清楚可 🌵 能涉及染色体异常或端粒酶激活。
重要的是要注意，不同的细胞系在体外培养中的代数范围 🐕 可能会有所不同培养。条件（如培 🌷 养基、生长因子和传代 🌲 频率）也会。影响细胞的寿命
4、成纤维 🦊 干 🐋 细胞的副作用
成纤维干细胞 🐕 治疗的潜在副作用
成纤维干细胞治疗是一种涉及将成纤维干细胞移植到受损或老化组织中的再生医学技术。尽管这种治疗有望改善组织功能和外观，但 🦉 仍然存在一些潜在的副作用：
局 🐞 部 🐝 反应：
注射部位 🕊 疼痛或 💮 不 🦆 适
肿胀、发 🌸 红或瘀伤
皮肤 🐠 变色
结节形 🐶 成 🦢
全身性反 🦉 应：
发热发、冷和全身不 🕊 适
头痛 🌹 和恶 🦟 心
过敏反 🐎 应（罕见 💮 ）
免 🌷 疫 🌷 反应 🐳 ：
移 🪴 植排斥（免疫系统攻击移植细胞）
肉芽肿（免疫细胞在注射部位聚 🌷 集）
其他潜在 🦄 并发症：
感染（注射部 🐟 位 🌵 或移植细胞）
血管栓 🐦 塞（移植细胞 🕸 阻塞血 🐛 管）
肿 🐼 瘤形成（非常 🕷 罕见 🐒 ）
注意 🦁 事 🦅 项 🐕 ：
这些副作用的严重 🦆 程度因个体而异。
许多副作用是暂时性的，将 🐛 在几天或几周内消退。
重要的是在进行治疗之前与合格 🌴 的医疗专业人员讨 🐱 论潜在的风险和收益。
定期监测和 🐠 后续治疗对于检测和管 🦟 理任何副作用至 🕸 关重要。
降低副作用 🕸 风险的措施：
选 🐬 择经验丰富的医疗 🐼 专业 🌸 人员进行治疗。
使 🐘 用干净、高质 🐕 量的细胞。
严格 💮 遵循术后护理说明。
定期进行后 🌺 续 🕊 检 🐠 查，以便及时检测和治疗任何问题。
