NSC干细胞的培养方案（nsc干细胞的培养方案）
- 作者: 张逸橙
- 来源: 投稿
- 2024-12-11
1、NSC干细胞的培养方案
NSC 干细胞培养方案
材料：NSC 干细胞（如 C17.2 细胞）
无血清神经元培养基（NSCM）
神经元生长因子 (NGF)
表皮生长因子 (EGF)
神经原性生长因子 (NTF)
聚L鸟氨酸
巢蛋白聚乙烯亚胺 (PEI)
方法：1. 涂层培养板
使用 10 μg/mL 聚L鸟氨酸涂覆培养板。
孵育过夜，然后吸除溶液。
使用 50 μg/mL 巢蛋白涂覆培养板。
孵育 24 小时，然后吸除溶液。
2. 培养基配制
在 NSCM 中添加以下成分：
NGF：20 ng/mL
EGF：10 ng/mL
NTF：10 ng/mL
3. 传代和培养
去除培养基并用 PBS 冲洗细胞。
添加含 0.25% TrypsinEDTA 的神经元培养基。
孵育 35 分钟，然后加入培养基以终止消化。
将细胞悬液转移到离心管中并离心 5 分钟，1000 rpm。
去除上清液并用培养基重悬细胞。
将细胞接种到已涂层的培养板中，密度为 50,000100,000 个细胞/cm2。
在 37°C、5% CO2 的条件下培养。
4. 分化
添加到培养基中的 NGF、EGF 和 NTF 可促进 NSC 的增殖。
要诱导神经元分化，请从培养基中去除 NGF。
培养细胞 710 天以促进分化。
提示：使用高品质细胞培养基和试剂。
定期监测细胞生长和形态。
必要时更换培养基。
避光培养细胞。
避免过度传代，因为这可能会影响细胞的增殖和分化潜力。
考虑使用生物反应器或细胞培养袋进行大规模培养。
2、nsc干细胞的培养方案
NSC 干细胞培养方案
材料：培养基：DMEM/F12 培养基，补充 2% B27、20 ng/mL bFGF、20 ng/mL EGF 和 1% 青霉素/链霉素
培养皿：表面涂有聚赖氨酸或聚甲基乙烯亚胺（PLL）的培养皿
胰蛋白酶EDTA 溶液：0.25% 胰蛋白酶、0.02% EDTA
解冻液：含 10% FBS 的 DMEM/F12 培养基
传代用干细胞冻存液：含 10% DMSO、90% FBS 的培养基
培养方法：
1. 解冻干细胞：
将冻存管从液氮中取出并快速解冻于 37°C 水浴中。
将干细胞转移到含解冻液的离心管中，以 200 x g 离心 5 分钟。
弃去上清液，用培养基重悬细胞。
2. 铺板：
将细胞重悬液接种到涂有 PLL 的培养皿中，以 1 x 10^5 5 x 10^5 个细胞/cm^2 的密度。
将培养皿置于 37°C、5% CO2 的培养箱中。
3. 培养：
每 23 天更换培养基。
当细胞达到 8090% 汇合时，传代或冻存细胞。
4. 传代：
弃去培养基并用 1 mL 胰蛋白酶EDTA 溶液处理细胞 5 分钟。
加入 10 mL 培养基，吹打细胞以去除其与培养皿的粘附。
将细胞转移到离心管中，以 200 x g 离心 5 分钟。
弃去上清液，用培养基重悬细胞。
将细胞重新铺板，如步骤 2 所述。
5. 冻存：
弃去培养基并用胰蛋白酶EDTA 溶液处理细胞 5 分钟，如步骤 4 所述。
用培养基重悬细胞并加入等体积的传代用干细胞冻存液。
将细胞转移到冻存管中，以每管 12 x 10^6 个细胞的量进行分装。
将冻存管缓慢冷冻于 80°C 冰箱中，然后转移到液氮中进行长期储存。
3、干细胞培养视频教程
干细胞培养视频教程
本教程将指导您完成干细胞培养的基本步骤。这些步骤包括培养基制备、细胞传代、细胞冷冻和解冻以及细胞鉴定。
材料：无菌培养皿
无菌培养基
移液枪和枪头
细胞培养箱
冰箱显微镜
步骤：
1. 培养基制备：
根据制造商的说明复苏细胞培养基。
将培养基倒入无菌培养皿中，并用无菌盖子盖住。
2. 细胞传代：
将培养皿放入细胞培养箱中。
培养 23 天，或直到细胞达到 7080% 的汇合度。
从培养箱中取出培养皿并倒掉培养基。
用无菌 PBS 洗涤细胞两次，每次 5 分钟。
将胰蛋白酶溶液加入培养皿中，并孵育 510 分钟，以使细胞从培养基底中脱离。
用培养基中和胰蛋白酶溶液，并用移液枪将细胞悬浮液转移到离心管中。
以 1200 rpm 离心 5 分钟。
倒掉上清液，并用培养基重悬细胞。
3. 细胞培养：
将细胞悬浮液接种到新的培养皿中。
培养基的体积应足以覆盖培养基底。
将培养皿放入细胞培养箱中。
4. 细胞冷冻：
将细胞悬浮液转至无菌冷冻管中。
加入冻存液，并混合均匀。
分装到冷冻安瓿或小瓶中。
将安瓿或小瓶放入装有异丙醇的冷冻盒中。
将冷冻盒放入 80°C 冰箱或液氮中冷冻。
5. 细胞解冻：
从 80°C 冰箱或液氮中取出冷冻安瓿或小瓶。
快速解冻安瓿或小瓶，使其在室温下或 37°C 水浴中解冻。
将细胞悬浮液转移到无菌离心管中。
以 1200 rpm 离心 5 分钟。
倒掉上清液，并用培养基重悬细胞。
6. 细胞鉴定：
可通过多种方法鉴定干细胞，例如免疫荧光、流式细胞术和基因表达分析。
根据您使用的特定方法选择适当的步骤。
结论：本教程提供了培养干细胞的基本步骤。请务必遵守无菌操作程序，并根据制造商的说明使用试剂。通过仔细遵循这些步骤，您可以成功维持干细胞培养物。
4、ipsc干细胞培养
什么是 iPSC 干细胞培养？
iPSC（诱导多能干细胞）是一类可从人体成体细胞（如皮肤细胞或血液细胞）通过特定因子重编程而获得的多能干细胞。它们具有与胚胎干细胞类似的多能性，但不需要破坏胚胎即可获得。
iPSC 干细胞培养步骤：
1. 收集成体细胞：从患者身上采集皮肤细胞或血液细胞等成体细胞。
2. 重编程：利用特定的转录因子（如 Oct4、Sox2、Klf4 和 cMyc）或其他方法对成体细胞进行重编程，以使其获得多能性。
3. 筛选和克隆：通过免疫染色或流动细胞术等方法筛选出重编程成功的 iPSC 克隆。
4. 培养和扩增：将 iPSC 克隆转移到适当的培养基和培养基质上，以进行培养和扩增。
5. 分化：通过培养条件或特定因子诱导，iPSC 可以分化为各种细胞类型，如心脏细胞、神经细胞或胰腺细胞。
iPSC 干细胞培养的关键因素：
重编程效率：重编程过程的效率影响 iPSC 培养的产量和质量。
培养基和培养基质：适当的培养基和培养基质对于 iPSC 的维持和分化至关重要。
细胞质量控制：定期进行细胞质量控制，如免疫染色和基因表达分析，以确保 iPSC 的多能性和稳定性。
无差错分化：开发有效的无差错分化方法以产生具有特定功能的、成熟的细胞类型。
iPSC 干细胞培养的应用：
疾病建模：利用特定患者来源的 iPSC 培养疾病特异性细胞模型，用于研究疾病机制和开发治疗方法。
再生医学：使用 iPSC 分化的细胞来修复受损或患病组织和器官。
药物发现：将 iPSC 分化的细胞用作高通量药物筛选的模型，以识别新的治疗靶点和药物。
个性化医疗：利用患者来源的 iPSC 为患者定制治疗方案，提高治疗效果和降低副作用。
