大鼠脂肪干 🐕 细胞提 🐦 取（大鼠脂肪干细胞提取实验报告）
- 作者: 李元苓
- 来源: 投稿
- 2025-03-20
1、大鼠脂 🐴 肪干细胞提 🐟 取
大鼠脂肪 🐋 干细胞提 🦆 取
材料 🐴 和 🦟 设备
成年 🐧 SpragueDawley 大鼠
异氟醚吸入麻 🐟 醉机 🦋
无菌 🌸 手术器械 🐒 （镊子、剪 🦟 、刀止血钳）
无菌 🐡 培 🌼 养 🍁 皿
Dulbecco 的改良 Eagle 培 🐱 养 🐬 基（DMEM）
胎 🐒 牛血 🦅 清（FBS）
胰酶胶原酶 🐯 II
细 🐈 胞 🌸 计数器 🐒
培养瓶步骤
1. 动物 ☘ 准 🌲 备
使用异氟 🐋 醚吸 🦍 入麻醉大鼠。
消毒手术区 🐳 域。
2. 脂肪组 🐎 织 🐴 采集 🐱
沿腹正中 🦈 线 🌿 做切口，暴露腹腔 💮 。
定位脂肪垫，小心将其剥离周 🪴 围组织。
将脂肪组织转移到无菌培养皿中 ☘ ，并用 DMEM 冲洗。
3. 脂 💐 肪组织消 ☘ 化 🦈
将 🦍 脂肪组织切成小块。
在培养皿中，用胰酶 🐋 和胶原酶 II 溶液消化脂肪组织 3060 分，钟同时在 37°C 的振荡器中孵育。
定期 💐 搅拌，以 🌴 确保充分消化 🐋 。
4. 细 🐴 胞 🦅 解离
消化完成后，用，滤网过 🐅 滤细胞悬液去除未消化的组织碎片。
用 🌷 DMEM 补充 FBS 冲洗 🌺 细胞 🐶 。
5. 细 🐠 胞 🐡 计 🐝 数和培养
使 🦟 用细胞计 🐘 数器计数细胞数量 🍁 。
将 🐴 细胞悬液悬浮在含有 10% FBS 的 🐳 DMEM 中，并接种到培养瓶 🦟 中。
在 🐅 37°C、5% CO2 的 🐺 条件下孵育细 🐅 胞。
注意事项确保所有仪 🦋 器和材料都无菌。
避免过度消化，因 🐺 为这可能会损害 🐬 干细胞。
小 🐎 心操 🐟 作大鼠，防止任何不必要的伤害。
遵循适当的实 🌵 验动 🐠 物护理规 🐴 程。
细胞表征流式细胞术：可以使用特定的 🦊 细胞表面标记物 🕸 （如 CD29、CD34、CD45）来表征脂肪干 🐺 细胞。
多向分化潜力：脂 🐕 肪干细胞可以通过分化为脂肪细 🦄 胞、成骨细胞和软骨细胞来 🦁 检测多向分化潜力。
2、大鼠脂肪 🐋 干细胞提取实验报告
大鼠脂肪干细 🐶 胞提取实验 🕷 报告 🦟
实 🐅 验目的：
在无菌条 🪴 件下从大鼠脂肪组织中提取间充质 🌴 干细胞。
材 🐵 料和方法：
材料：雄性 🕸 Wistar 大鼠 (812 周龄)
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM)
胎牛血 🐬 清 ☘ (FBS)
胰 🐴 蛋白 🦆 酶 🌲
胶原 💐 酶 IV
红 🐝 细胞裂解缓冲 🌸 液
细 🐞 胞培 🐠 养瓶 🐋
无菌移液管和培养 🌺 皿
方法：1. 大 🌴 鼠获取 🌺 和牺 🕊 牲：
从饲养环境中 🐕 取出大鼠并处死。
经腹部正中切口 🌹 收 🍀 集腹腔脂肪组织。
2. 酶 🌳 解 🐝 ：
将脂肪组织用化学物酶 🌲 溶液（DMEM、FBS、胰 🦋 蛋白酶和胶原酶 IV）消化 30 分钟。
涡旋混 🕊 合并 🦁 过滤消化液，收集细胞悬液。
3. 红 🌳 细 🐠 胞裂 🐅 解：
用红细胞裂解缓冲液处理细 🌳 胞 ☘ 悬液以裂解红细胞。
离心并收集有核细胞 🐺 。
4. 细 🐺 胞培养 ☘ ：
将有核细胞 resuspend 在 🐳 DMEM + FBS 培养基中。
接种细胞培养瓶 🦋 并置于 🌾 培养箱中 (37°C，5% CO2)。
5. 细 🐘 胞贴 🕊 壁 🕸 ：
培养 24 小时后，更换培养基以去除未 🦢 贴壁细胞。
继续培养细胞，每 23 天更换一次培养基 🐋 。
结果：培养 710 天后，纺锤形贴壁细胞覆盖细 🦟 胞培养瓶表 🐳 面。这，些细胞表 🌼 现出间充质干细胞的特征包括：
粘附 🌾 于塑料： 细胞贴壁并形成 🐟 单层
成纤维细胞样形 🌵 态 🐕 细胞： 呈长纺锤形
多能性： 细胞可以分化为脂肪细胞、软骨细胞 🐱 和骨细胞
讨论：成功提取的大鼠脂肪干细胞具有干细胞的特征，包括多能性和自我更新能力。这 🐧 ，些细胞具有广泛的应用前景例如：
组织 🐴 工程 💐 和再生医学
疾病建 🍀 模和药物 🕷 测试
细胞疗 🌾 法 🌳
结论：本实 🐅 验成功地从大鼠脂肪组织中提取了间充质 🐼 干细胞。这些 🌸 细胞具有间充质干细胞的特征，并，且。由于其多能性和易于培养具有广泛的应用潜力
3、大鼠脂 🌵 肪间充质干 💐 细胞提取
大鼠脂肪间充质干细胞 🐬 提取
材料：大鼠
无 🌵 菌 🌵 手术器 🦋 械
注 💮 射器和 💐 针头
含 🐛 胶原酶的培 🐞 养 🌸 液
离心机培养基
血清
培养瓶
步骤：
1. 动 🌷 物准备：
术前禁食 🌳 12 小时 🍁 。
2. 手 🌹 术 🐛 ：
在无菌条件 🕸 下，对大鼠进行腹腔开腹。
定位大鼠 🐵 的腹膜 🐝 后脂 🐛 肪垫。
小 🐼 心翼翼地切除约 🌸 23 克 🐱 的脂肪垫。
3. 消 🐛 化 🍀 ：
将脂肪垫转移到含胶 🌺 原酶的培养液中。
在 37°C 下 🕸 搅 🐠 拌孵育 12 小时。
4. 过 🦆 滤 🐝 ：
将消化后的脂肪组织通过的过 100 μm 滤器过滤 🐼 。
用含 🌺 血 🦆 清的培养基洗涤滤 🐈 液。
5. 离 🐶 心 🐈 ：
将滤液在 300 x g 下 🐈 离心 10 分钟。
6. 重 🐦 悬 🦆 ：
去除上清 🐼 液，并用含血清的培养 🐟 基重悬细胞。
7. 播种 💐 ：
将细 🐛 胞悬液接种到培养瓶中。
在 37°C、5% CO2 的 🦅 孵育器中 🌸 培养。
8. 培养 🦋 ：
每 23 天 🌷 更 🐺 换培养基。
当细胞达到 8090% 的汇合度时 🐋 ，传代细胞。
提示：使用无菌 🐞 技术，以防止污染。
使 🦄 用新 🐴 鲜的脂 🐘 肪垫，因为陈旧的脂肪垫的干细胞产量较低。
优化胶原酶的浓度和孵育时间，以最大化干 🦆 细胞产 🦁 量。
细胞的扩增 🐵 可 🐛 能需要数周 🐘 时间。
4、大鼠脂肪干细胞 🐟 提取方法
材料：活的雄 🐠 性或雌性大鼠（体重约 250300 克）
无 💐 菌 🐦 手 🐈 术器械
磷 🕸 酸缓 🦋 冲盐溶液 (PBS)
胶原酶溶 🦅 液（1 mg/ml）
培养 🌵 基（如 DMEM/F12 补充 10% 胎牛血清）
50 ml 锥 🦁 形 🐞 离 🦁 心管
40 微米细 🌹 胞 🦊 过滤器
细胞培养 🌻 瓶 🕊
方法：1. 动物 🐳 准 🐈 备：
将大 🌳 鼠全身 🍀 麻醉。
剃除腹部的毛发并用 🐋 碘溶液消毒。
2. 脂肪组织 ☘ 切除：
在腹部中线做一个 23 cm 的切口 🌵 。
仔细钝 🌲 性分离腹壁和内脏，暴露出腹壁脂肪垫。
使用无菌剪刀切除 🦢 约 12 克脂肪 🐋 组织 🐬 。
3. 脂肪组织消 💮 化：
将脂 🦋 肪组织转移到含有 10 ml 胶原酶溶液的 50 ml 锥形离心管中。
在 37°C 的摇床孵育器中孵育 4560 分钟 🐴 ，每分钟摇 15 晃 🌻 一次。
4. 细胞 🐳 过滤：
孵育后，使用 🐶 40 微米细胞过滤器过 💮 滤脂肪 🌸 组织消化液。
用 🌷 PBS 冲洗过滤器以去除残 🕊 留的 🐴 胶原酶。
5. 细胞 🍁 收集 🦄 ：
将过滤后的细胞悬液转移到培养基中，并用 PBS 洗涤离心管以回收任 🌲 何剩余的细胞。
以 🐺 500 x g 离心 5 分钟。
6. 细胞 🌳 培养：
除去 🐴 上清液并用新鲜培养基重悬细胞。
将细胞接种到细胞培养 🐼 瓶中培养，于含 5% CO2 的培 🦊 养 37°C 箱中 🐱 。
定期更换培养基 🌿 以 🌵 去除废物并 🦁 补充营养物质。
注意：使 🐱 用无 🌺 菌技术至关重要 🐬 ，以防止细胞污染。
消化时 🌴 间和胶原酶浓度应根据脂肪组织的厚度进行优化 🦊 。
分离后的脂肪干细胞可以立即使用或冷 🐒 冻 🦟 保存以备将 🕷 来使用。
