小鼠肌腱干细胞分 🐱 离培养（肌腱干细胞的获取和培养）
- 作者: 郭允翊
- 来源: 投稿
- 2025-03-06
1、小鼠 🌺 肌腱干细胞分离培养
小鼠肌 🌺 腱干细胞分离培养
材料：小鼠 🐦 肌 🌲 腱 🌴 组织
Hank's 平衡 🌷 盐 🐠 溶 🦄 液 (HBSS)
胶 🌳 原 🐵 酶 🐘 II
Dulbecco's 改 🐦 良 Eagle 培 🐡 养 🌷 基 (DMEM)
胎牛血清 🕊 (FBS)
抗 🦅 生 🐛 素抗 🐘 /真菌剂
步骤：1. 获取小鼠 🦋 肌腱 🌿 组织：
麻醉 🦢 小 🦁 鼠 🌾 。
消 🐼 毒手术部 🦁 位。
切开 🐈 皮肤，暴露肌 🕊 腱 🦍 。
切除 12 厘 🦍 米的肌腱组织 🐈 。
2. 消化肌 🌵 腱组织 🦋 ：
将肌腱组织切成小块 🕊 。
将组织块浸入含有胶原 🦁 酶 II 的 🐘 HBSS 中。
在 🌹 37°C 下孵育 24 小时，期间每小时搅动一次。
3. 离心和收 🌸 集细 🌿 胞：
将消化 🌺 后的混合物 🦁 通过 100 μm 滤网过滤以去除 🐱 组织碎片。
将滤液转移至 🐕 离心管 🦄 并以离心 🌷 1200 rpm 分 5 钟。
吸出上清液，沉淀物中 🦆 即为肌腱 🕷 干细胞。
4. 培养肌腱干 🦍 细胞：
将 🐧 沉淀物重悬于含 10% FBS 和抗生素抗/真 🦍 菌剂 🐛 的 DMEM 中。
将 🦄 细胞铺板于组 🐳 织培养板或培养瓶中。
在 🐠 37°C、5% CO2 的条件下培养。
5. 更换培 🦅 养 ☘ 基 🦊 ：
每 🐱 23 天 🐅 更换培 🦈 养基一次。
当细胞长至 8090% 的 🌿 汇合度时 🐡 ，可 🐶 以传代传代。
6. 传 🐳 代：
吸出培养 🌵 基，用 PBS 洗涤 🍀 细胞。
加 🌷 入胰蛋白酶溶液，孵育 510 分钟。
将细胞悬浮在 🦋 新鲜培养基中。
将细胞铺板于新的培养板 🦆 或培养瓶中。
提示：无菌操 ☘ 作至关重要，以防止 🐕 污 🐡 染。
胶原酶 II 的浓度和 🦉 孵 🌾 育时间应根据肌腱组织的年龄和 🐠 类型进行优化。
分 🐒 离后的肌腱干细胞 🦆 可以用于各种实验，包括体外扩增分 💮 、化和移植。
2、肌腱干细 🌾 胞的获取和培养
肌 🐬 腱干细胞的获取
手术活 🐅 检 🌷 ：
从受影响 🐋 的肌腱中移除一小块组织。
这种方法可 🐬 以提供高质量的干细胞样本，但，具有侵袭性可能会留下疤痕。
针 🦄 吸活 🌷 检：
使用针头从 🪴 肌腱中抽取少量组织。
这种方法的侵入性 🌲 较小，但 🦈 可能无 🕷 法获得足够数量或质量的干细胞。
微冲洗：将生理盐水注入 💐 肌腱，然后移 🌻 除。
生 🌹 理盐水中 🐦 会携带干细 🦟 胞。
这种方 🍁 法的侵入性较小，但产量可能较低。
培养获得的肌腱组织 🦊 进行以下步骤进行培养：
1. 酶消 🐼 化：使用胶原酶和其他酶将组织 🌿 分解成单 🦊 细胞悬液。
2. 洗涤洗：去多余的 🌵 酶和 🐅 碎屑。
3. 培养：细胞悬液接种在含生长因子的 🐶 培养基中，以促进干细胞的生长 🐳 和增殖。
4. 筛 🐎 选：使用免疫表型或其他标记物 🐟 对干细胞进行筛选。
5. 扩 🌷 增：筛选后的干细胞可以进一步扩增以，获得足够数量用于治疗。
培养基肌腱干细胞的培养基通常包含以下 🌲 成分：
基 🐺 础培养基：如 Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM)
血清：如胎牛血清 🐞 (FBS)
生长因子：如成纤维细胞生长因子 🍀 (FGF) 和表皮生长 🍀 因子 (EGF)
抗生 🦢 素：如青霉素和 🌲 链霉素
培养条件温 🐎 度 🌳 ：37°C
二氧化碳浓 🦢 度：510%
培养基 🌾 更换：每 23 天
质量控制培养的肌腱干细 🌹 胞应进行以下质量控制测试：
增殖能力：通过 🐞 细胞计数或 MTT 分析确定。
多向分化潜能：通过诱 ☘ 导干细胞分化为肌腱细 🐺 胞、骨细 🐎 胞或脂肪细胞来确定。
免疫表型：使用免疫 🦟 荧光染色或流式细胞仪分析干细 🐶 胞表面标 🐬 记物。
无菌性：通过细菌和真菌 🪴 培养来验证。
