干细胞流式鉴定 🌿 步骤（造血干细胞流式检测结果分析）
- 作者: 马未晞
- 来源: 投稿
- 2025-03-24
1、干细胞流 🐠 式鉴 🐧 定步骤
干细胞 🌿 流式鉴定步 🐼 骤
1. 样 🌳 品制备
分离干细胞，如 🦄 从骨髓或脐带血中 🦋 分离。
将细胞洗涤并重悬浮于合适 🐱 的缓冲液 🌷 中 🦟 。
计数 🌿 细胞 🌴 并根据所需数量调整稀释度。
2. 抗体 💮 标 🌼 记
选择针对感兴趣干细胞 🐺 表面标记的 💐 抗体 🌲 。
将细胞与抗体孵育，具体时间 🍁 和温度取决于使用的抗体。
洗涤细胞以去除未结合 🦁 的抗体。
3. 流式 🍁 细 🐞 胞术 💮
将标记后的细胞 🐧 分析在流式 🕸 细胞仪上 🐝 。
仪器将细胞按大小、形态和荧光标记进 🪴 行分类。
收集数 🐈 据，包括细 🦅 胞 🌼 计数和荧光强度。
4. 数据分 🦊 析 🐅
使用流式细胞 🌷 术软件分析数据 🐝 。
创建散点图和直 🦁 方图，显示不同细胞群体中荧光 🦟 标记的分布。
门限细胞群体，识别阳性（表 🦊 达感兴趣标 🌹 记）和（阴性）不表达 🐬 感兴趣标记细胞。
5. 表 🐘 面标记选择 🐛
不同的干细胞类型具有特异 🐟 性的表面标记。
常 🕊 见的干细 🐼 胞标记包括：
CD34+：造 🐞 血 🐛 干细胞 🦍
CD133+：神经 🐝 干 🦋 细 🐠 胞
SSEA4+：胚胎干 🌻 细 🐺 胞 🕸
提示：使用适 🌾 当的对照，例，如未标记的细胞或同 🦁 型体对照抗体以排除非特异性标记。
优 🐟 化抗体浓度和孵育条 🐋 件以获得最佳信号。
使用细胞因子或激活剂预处 🐟 理细胞可增强表面标记的表达 🐋 。
2、造血干细胞流式检测结果 🐈 分析
造血 💮 干细胞流式检测结 💮 果 🐅 分析
简介造血干细胞 (HSC) 流式细胞术是一种分析 HSC 群体中不同亚群的强大技术。它可以通过标记特定细胞表面标志物来识别和量化流式 HSC。检。测结 🐺 果的分析对于 🐞 理解和研究造血系统至关重要
数据采集流式细胞 💮 仪采集的 🐡 数据通 🦟 常包含以下参数：
前 🌷 向 🐞 散射 (FSC)：指示细胞大小
侧向 🐴 散射 ☘ (SSC)：指 🌿 示细胞颗粒度
荧光通道：检 🐧 测特定细胞标 🐈 志 🦊 物的标记表达水平
门控策略为了识别特定细胞群体，需要建立 🌲 适当 🐯 的门控 🐞 策略。这涉及以下步骤：
1. 细胞碎片剔除：排除细 🍁 胞 🦍 碎片、双重峰值和不相关的粒 🪴 子。
2. 活细胞选择：使用活力染料（例如 PI 或选 🐟 择活细胞 7AAD）。
3. 淋巴细胞门控：使用 🐋 FSC 和 SSC 参数识别淋巴细 ☘ 胞，包括细胞细胞和 T 自、B 然杀伤细胞。
4. 骨髓细胞门控：使用额外的标记（例如 CD45 和 CD34）识别骨 🐬 髓细胞，包括 HSC。
HSC 亚 🐎 群鉴定
HSC 可进一步细分 🐈 为以下亚群：
LTHSC (长 🦈 期 🌹 HSC)：CD34? CD38? SLAMF1? CD90?
STHSC (短 🦄 期 🐬 HSC)：CD34? CD38? SLAMF1? CD90?
MPP (多能祖 🦍 细胞 ☘ )：CD34? CD38? SLAMF1? CD90?
CMP (共髓祖细胞 🐋 )：CD34? CD38? SLAMF1? CD90?
MEP (巨核红 🌲 系祖细胞)：CD34? CD38? SLAMF1? CD90?
数据分析流 🐱 式检测结果可使用专门的软 ☘ 件程序进行 🦆 分析，包括：
百分 🐺 比分析：计算特定亚群在总骨髓细 🦆 胞中占的百 🌴 分比。
绝对计数：确定特定亚群在 🐴 给定样本中的绝对 🐒 细胞 🐕 数。
散点图分 🌺 析：评估不同 🦍 标记表达之间 🪴 的相关性。
统计分析：比较不同 🐕 组或 🌸 处理条件之间的 HSC 亚群差异。
注意事项分析造血干细胞流式检测结果时，需要 🌹 考虑以下注意事项：
抗体特异性：确保使用的 🐛 抗体反应特 💐 异的细胞标志物 🐠 。
仪器校准 🐝 ：定期校准流式细胞仪以确保准确和可重现的结 🦁 果。
补偿设置补偿：不同荧光通道之间的溢出，以避免假阳性或假阴性结 💮 果。
生物 🌼 学 🐴 变异：考虑个体之间的生物学变异，这可能会影 🦄 响 HSC 亚群的分布。
结论造血干细胞流式检测结果分析是一种强大的工具，用于表征和量化造血干细胞亚群。通，过。仔细的门控策略和适当的分析技术 🐈 可以深入了解造血系统并研究其在疾病和治疗中的作用
3、干细胞 🌺 流式鉴定步骤有哪些
干细胞流 🐯 式鉴 🐝 定步骤
1. 样品制备 🦄
收 🦟 集干细胞样品（如骨髓、脐带 🐛 血或脂肪组织）。
离心分离单核细 🐺 胞 🐟 。
2. 标记 🌳 干细胞
使用 🕸 抗 🌴 体 🐧 标记靶向干细胞表面或胞内标志物。
常见标志物包括 🦅 ：
CD34（造血干细 🌾 胞）
CD90（间充质 🌺 干细胞）
Oct4、Sox2（胚胎干细胞 🕷 ）
3. 样品 🐦 孵育
将 🌵 标记抗体与样品孵育，让抗体与干细胞 🐘 表面或胞内标志物结合。
4. 洗 🐅 涤 🐟
洗涤样品以去 🌲 除未结合的 🍀 抗体。
5. 流 🦊 式细胞术分 🌺 析
使用流式细胞仪分析样品流式细胞仪。将细胞悬液逐个 🌼 细胞地检测，并测量细胞大小、颗。粒性和荧光标记强度
根据所用抗体的 🦅 荧光发射特性，可以识别并分 🦉 类不同的干细胞亚群。
常 🌿 规步 🐘 骤：
1. 样品制备：准备需要检测的细胞悬 🦊 液。
2. 染色：使用标记有荧光抗体的细胞表面标记物或胞内标记 🌹 物对细胞 🐕 进行染色。
3. 清洗：去除未结 🕊 合 🐴 的 🐈 抗体。
4. 流式细胞术分析：使用流式细胞仪分析染色的细胞，检测细胞荧光强度 🌼 和大小等参数。
5. 数据分析分析：流式细胞术数据，确定 🐠 不同细胞群的百分比和平均荧光强度 🦁 。
6. 门区设定：根据阳 🐠 性 🌹 对 🌷 照样品或已知阳性细胞设定门区，以区分阳性细胞和阴性细胞。
7. 鉴定：根据细胞表面标记物或胞内标记物 🕸 的表达模 🦁 式鉴定，特定的干细 🌵 胞亚群。
附 🐵 加步骤 🦊 （可选 🐴 ）：
细胞分选：使用流式细胞分 🍁 选仪将特 🐝 定 🦋 干细胞亚群纯化。
死细胞排除：使 🍁 用死细胞染料或其他方法排除死细胞。
4、干细胞流式鉴定步 🌸 骤 🦄 包括
干细 🦄 胞流式 🐞 鉴定 🐴 步骤包括：
1. 样品准备：收集和处理干细胞样品 🌸 ，包括细胞分 🐅 离、洗涤和标记。
2. 表面抗原标记：使用抗体对细胞表面上的 🕸 特定抗原 🐴 进行标记。这。些抗原可以用来识别和表征不同类型的干细胞
3. 流式细 🌵 胞术分析：将标记 🐝 好的细胞通过流式细胞仪进行分析。该仪器测量每个细胞的荧光强度和散射光，从。而区分具有不同抗原表达 🦍 模式的细胞群
4. 数据分析：使用专门的软件分析流式细胞术数据，以获得细胞群体的百分比、平均荧光强度等信息 🐅 。
5. 细胞分选（可选）：根据抗原 🐼 表达模式，使用流式细胞分选仪将感兴趣的细胞群与其他细 🌷 胞群分开。
