如何确认肿瘤干 🐞 细胞（如何确认肿瘤干细胞是否移植）
- 作者: 胡乔煜
- 来源: 投稿
- 2025-04-06
1、如何确认肿 🦍 瘤干细胞
确认 🌷 肿瘤 🌸 干细胞的 🐱 方法
1. 表面标记物分 🐵 析 🌻
CD133：在许多类型的 🌷 肿瘤干细 🌸 胞中表 🐦 达
CD44：与肿瘤细胞侵袭和 🐶 转 🦁 移相关 💐
CD24：在乳腺癌和结直肠癌 🐦 的 🦆 CSC 中表达
ALDH1：参与干细胞自我更 🐝 新和分化的酶
2. 功 🌲 能性 🌲 检测 🐠
克隆球形成：CSC 能够形成由单一细胞衍 🕷 生的球状克隆
微环境形成 🐅 ：CSC 可 🐝 以促进肿瘤微环境的形成，包括血管生成和基质 🕷 重塑
分化潜力：CSC 能够分化为肿瘤细胞谱系中的不 🌿 同细胞类型，例如干细胞和前 🐝 体细胞
3. 表皮生长 🕷 因子受体表 (EGFR) 达
EGFR 在许 🐝 多类型的 CSC 中过度表达，并与肿瘤生长和侵袭有关
4. 成瘤 🌼 能 🌲 力
在免疫缺 🐠 陷小鼠中，CSC 能，够植入肿瘤 🌸 并且生长出与原发肿瘤相似的 🦢 肿瘤
5. 肿 🐟 瘤 🌾 复 🌷 发
CSC 被认为是肿瘤复发和治 🐞 疗抵抗的原因因为，它们 🌼 具有自我更新 🐳 和分化的能力
6. 其他 🐡 方法 🐳
流式细胞术 🦉 分选：基于表 🌻 面标记物分离 CSC
CRISPRCas9 基因 🐴 编辑：靶向 CSC 特 🌵 异性基因以鉴定其功能 🌷
单细胞 RNA 测序：表征 CSC 的转录组谱和异质性 🦍
注意：结合多种方法可以 🐡 提 🪴 高 CSC 鉴定的准确性。
CSC 的表面标记 🕸 物和功 🐞 能特征可能因 🕊 肿瘤类型而异。
CSC 是一个异 🕊 质性 🐺 的群体，在不同 🌹 的肿瘤中可能有不同的亚群。
2、如何 🦋 确认肿瘤干 🐎 细胞是否移植
确认肿瘤 🦢 干 🪴 细胞移植的步骤：
1. 分离 🌵 和纯化肿 🐠 瘤干细 🐺 胞：
从 🐎 肿瘤组织或细胞系中分离出 🦍 富含肿瘤干细胞的细胞群体。
使用细 🌹 胞表型标记物（例如 CD44、CD133、ALDH）进行纯化。
2. 体 🐳 外培养 💮 ：
将纯化的 🦍 肿瘤干细胞在选择性生长培养基中进行体外培养。
培养条件应促进 🌺 肿瘤干细胞的自我更新和增殖。
3. 体 🐅 内 🌹 移植 🐶 ：
将体外培养的肿瘤干细 🌴 胞 🐴 移植到免疫缺陷 🐺 小鼠中。
移 🕷 植 🐶 小鼠 🐕 通常使用皮下、尾静脉或颅内注射。
4. 监测肿瘤生 🌺 长：
定 🐶 期监测移植小鼠的肿瘤生长和存活率。
通常 🐧 使用 🕊 细胞学、组织学或成像技术进行监测。
5. 验证 🐛 肿瘤特 🦆 异性：
从形成的肿瘤中收集 💐 细胞 🌳 ，并进行免疫 🦍 组化或荧光原位杂交（FISH）染色。
这些技术可用 🌲 于确定 🦋 肿瘤细胞是否 🕷 来自移植的肿瘤干细胞。
6. 评估肿瘤发生 🦄 能力：
再次从形成的肿 🪴 瘤中收集细胞，并进行次级 🐎 移植实验。
如果二次移植后出现肿瘤生长，则表明肿瘤干细胞已成功移植并保留了 🌿 其致瘤能力 🌷 。
7. 评估 🐕 自我 🕸 更新：
使用细胞表 🦢 型标记 🐧 物或克隆形成试验，评估移植后肿瘤干细胞的自我更新能力。
肿 💐 瘤干细胞应能够产生具有相同表型和致瘤能力的后代细胞。
8. 功 🐴 能分析：
根据需要，对，移植后肿瘤干细胞进行 🐛 功能 🐯 分析例如侵袭、迁移和耐药性。
这些分析可提供对肿瘤干细 🌹 胞生物学 🦈 和治疗靶点的见 🐝 解。
3、如何 🦄 确认肿瘤干细胞移植成功
确认肿 🐘 瘤干细胞移植成功的方 🐴 法 ☘ ：
1. 体内 🦄 成瘤形成 🌿 ：
将移植的肿瘤 🌿 干细胞注射到免疫缺陷小鼠或模型动 🐕 物中。
经过一段时间的等待，监测小鼠体 🐝 内是否有肿瘤形成。
若形成肿瘤，说，明移 🍀 植的肿瘤干细胞具有成瘤能力证实移植成功。
2. 体外球体 🐘 形 🍀 成 🌳 测定：
将移植的肿瘤干细胞培养在悬浮培养基中，使其形成 🐅 球状簇。
球状簇的形 🐘 成 🌳 能力反映了肿瘤干细胞的自我更新和分化能力 🐴 。
若形成大量球 🐯 状簇，说，明移植的肿瘤干细胞具有干 🐳 细胞 🐘 特性证实移植成功。
3. 免疫组 🐱 化染色 🍁 ：
对移植后的 🐼 组织进行免疫组化染色 🐦 ，检测肿瘤干 🦁 细胞特异性标志物的表达。
例如 🌾 ，检测 CD133、CD44 或 ALDH1 等标志物 🐠 。
若检 💮 测到这些标志物的表达，说明移植的肿瘤干细 🦍 胞已成功植入并增殖。
4. 流式细 🐎 胞 🐅 术：
对移植 🦍 后的组织或细胞悬 🌺 液进行流式细 🦆 胞术分析。
检测肿瘤 🐘 干细胞特异 🐺 性标 🪴 志物，如 CD133 或 CD44 的表达。
若检测到 🐘 高表达群体，说明移植的肿瘤干细胞已成功植入并增殖。
5. 分 🐴 子 🐈 检 🌴 测：
对移植后的组织或细胞进行分子检测 🍁 检 🦈 测，肿瘤干细胞特异性基因的表达。
例如，检 🌹 测 Oct4、Sox2 或 Nanog 等基因。
若检测 🐕 到这些基因的高表达，说明移植的肿瘤干细胞已成功植入并增殖。
6. 功能检 🐳 测：
对移植的肿瘤干细胞进行功能 🦊 检测，验证其干细胞特性。
例 🐼 如，检 🕸 测其分化能力、自我更新能力和侵袭能力。
若这 🌲 些功能均正常，说明移植的肿瘤干细胞已成功植入并保持其干细胞特性。
注意：确认肿瘤干细胞移植成功的标准可能因移植方法肿瘤 🌲 、类型和模型系统 🐞 而异。建。议结合多种方法以 🐈 提高结果的可靠性
4、如何确认肿瘤干细 🕊 胞受损
检测肿瘤干 🌷 细胞特异性标记物的表达：
CD44：通常 🦊 在肿瘤干细胞中高 🌾 度表达，而分 🌷 化细胞中表达较低。
CD133：与肿瘤起 🍀 始性相关，在肿瘤干 🦆 细胞 💮 中表达较高。
ALDH1：醛脱氢酶，在肿瘤 🦊 干细胞中活性增强 🐕 。
功能性 🐵 检测：
克隆形成能力：肿瘤干细胞有无限增殖和分化成多种细胞类型的潜能 🐒 ，可通过克隆形 🕊 成分析来评估。
肿瘤形成能力：将 🦍 肿瘤细胞（包括 💮 潜在的肿瘤干细胞）移植到免疫 🐦 缺陷小鼠中，并监测肿瘤形成。
药物品质响应：肿瘤干细胞对某些化疗或 🐯 靶向治疗药物表现出耐药性。通过分析对这些药物 🐝 的敏感性，可。以推断肿瘤干细胞的存在
其 🦋 他指标：
细胞表面标记 🐠 ：可以 🕊 识别肿瘤干细胞亚群的其他细胞表面标记包括 CD24、CD47 和 CD166。
多重耐药蛋白 (MRP)：肿瘤干细胞通常过度表达 MRP，这有助于它们泵 🐯 出化疗药物。
自噬：肿瘤干细胞显示出高水平的自噬，这可能有助于它们抵 🐞 御细 🕊 胞应激。
基因表达谱：通过 RNA 测序或基因微阵列分析，可以识别与肿瘤干细胞特性相关 🐛 的独特基因表达谱。
重要的是要注意，这，些检测方法并非完全特异性 🦟 并且不同类型的肿瘤可能具有不同的肿瘤干细 🐋 胞标志物。因，此 🐦 。通常需要结合多种方法来准确确认肿瘤干细胞受损
