小鼠子宫内膜干细胞（小鼠子宫内膜干细胞培养方法 🌸 ）
- 作者: 胡瑾瑜
- 来源: 投稿
- 2025-02-21
1、小鼠子宫 🦈 内膜干细胞
小鼠 🦉 子 🐬 宫内膜 🐝 干细胞（mEMSCs）
小鼠子宫内膜干细胞 (mEMSCs) 是一类多能 🌾 干细 🐡 胞，存 在于小 🕸 鼠子宫内膜组织中。它们具有以下特征：
分化 ☘ 潜能 🌻 ：
mEMSCs 可分化为子 🦈 宫内膜上皮、间质 🕸 和腺体细胞。
增 🌴 殖能 🦊 力 ☘ ：
mEMSCs 具有高的 🦍 增殖 🌳 能力，可以自我更新并扩增。
免疫调节 🐟 特性 🌵 ：
mEMSCs 表达 🐱 免疫调节分子，如 CD90 和 CD105，可抑 🐎 制免疫 🐴 反应。
来源和分 🐝 离 🌳 ：
mEMSCs 通常从收经期小鼠子宫中分离。可。以通过机械解离和免疫磁珠分选 🦍 技 🦊 术 🌺 获得
应用：mEMSCs 在以下 🦈 研究领域具有 🌴 潜在的应用 🦉 ：
子宫内膜修复：用于修复损伤或疾病导致的子宫内膜缺损 🦉 。
妇科疾病治疗：探索用于治疗子宫内膜异位症子宫、肌瘤和子宫 🌵 腺肌病等妇科疾病的可能 🍁 性 🐦 。
干细胞库：作为 🦁 妇科再生医 🌳 学干细胞库的 🦟 候选来源。
药物筛选：用于建立药物筛选平台，评估针对 🐕 妇科疾病的潜 🐦 在治疗方法。
局限性：与其他干细胞类型类似，mEMSCs 的，临床应用仍面临一些 🦈 挑战包括：
免疫 🦄 排斥：异种移植 🌾 中可能发生免疫排斥反应。
分化控制：需 🌴 要开发方法来控制 mEMSCs 的分 🦅 化方向 🌳 。
长期安全性和有效性：需要进行 🌷 长期研究以评估 mEMSCs 的安全性和有 🦅 效性 🐘 。
尽 🌴 管存在这些挑战在，mEMSCs 子 💐 宫内膜修复和妇科疾病治疗领域显示出巨 🪴 大的应用潜力。持，续的研究和技术进步有望克服这些限制促进在 mEMSCs 临。床上的应用
2、小鼠子 🐺 宫内膜干细胞培养方法
小鼠子宫 🦊 内膜干细胞培养方法 🕷
材料：新 🐺 鲜的小鼠子 🌷 宫
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM)/F12 (含 💮 10% FBS)
胶原 🐴 酶 🐅 IV (200 U/mL)
DNase I (100 U/mL)
抗生素 💮 抗真菌溶 🐅 液 🦊 （如青霉素链霉素）
培养皿移液枪
培 🌸 养 🕸 箱（37°C、5% CO2）
步骤：1. 收 🦁 集子 🌴 宫：
经腹 🐧 切取小鼠子宫，置 🐝 于培养皿中 💐 。
用无菌 PBS 冲洗子宫以去除 🌳 任何污染物。
2. 酶 🐬 消 🌷 化 🐠 ：
将子 🌷 宫切成小块，放入 🐼 含胶 🌾 原酶IV和DNase I的培养基中。
在 🐕 37°C摇床上孵育 🦆 1小时，每15分钟轻轻吹打一次 🌼 以促进消化。
3. 过 🕊 滤 🍁 ：
将消化后 🦢 的组织液过滤过过滤70 μm器以去除碎片。
4. 离心 🐦 ：
将过滤后 🐞 的组织液以 🪴 1200 rpm离心10分钟，收集细胞沉淀。
5. 重悬 🪴 ：
将细胞沉淀重悬于含FBS的 🐟 DMEM/F12培养 🌺 基中。
6. 培 🐕 养 🐅 ：
将细胞接种到 🐧 预先铺有凝胶基质的培养皿中。
在 🦁 37°C、5% CO2的 🐶 培养箱 🍀 中培养。
7. 培养 🐟 基更换：
每23天 🦢 更换 🌹 培养基并监测细胞生长。
鉴 🐵 定干细胞：
免疫表型：使用流式细胞术检测干细胞标 🐼 志物，如Sca1和 🐡 cKit。
株球形成试验：将细胞接种到 🕸 低浓度的培养基 🐕 中，并在培养14天后形成球形克隆。
体内 🌺 分化能力：将 🕸 细胞移植到雌性小鼠体内，并检测 🐋 其对雌激素和孕激素刺激的反应。
注 🌷 意事 🐵 项：
使用无菌 💐 技术以最大限 🦉 度地减少污染 🌺 。
定 🪴 期监测细胞生长并根据需要 🌲 进 🌷 行亚培养。
优化培养基和条件以 🕸 最大化干细胞的获取和维持。
3、干细胞内膜性 🐛 细胞器丰富吗
4、小鼠子宫内膜干细胞 🕷 培养 🐕
小鼠 🦄 子宫内膜干细胞培养 🐕
材料小鼠 🌺 子宫组织
Hank's平衡 🦉 盐溶液（HBSS）
胶原 🌸 酶 🐴 IV
人 🦊 表皮生 🐬 长因子（EGF）
碱性成 🐞 纤维 🌸 细胞 🐘 生长因子（bFGF）
Dulbecco's改 🌺 良 🌼 Eagle培养基 💐 （DMEM）/F12
胎 🐛 牛 💐 血清 🐈 （FBS）
抗生素 🦈 抗 🦆 真菌剂
培养皿玻 🐛 璃 🌹 盖 🌾 玻片
方法1. 组 🐧 织 🐵 采集 🕸
从雌性小鼠中解 🐋 剖 🐟 出 🌴 子宫。
用HBSS冲洗并 🌹 去除 💐 多余组织 🐡 。
2. 酶 🦅 解 🌷
将子宫组 🌷 织剪 🐺 成 💐 小块。
加入含胶原酶IV的 🌷 解离缓冲液，在37°C孵育12小，时直至组织完全解离。
过滤细胞悬 🐺 液，去除未消 🐶 化组织。
3. 培 🕸 养
将细胞悬液接种到 🦄 涂有玻 🪴 璃盖玻片的培养皿中。
使用含EGF、bFGF、DMEM/F12、FBS和抗生素抗真菌剂的 🐬 培养 🌺 基 🐶 。
在 🐦 37°C、5% CO2环境下 🐱 培养。
4. 克隆形 🌼 成
待细胞贴壁后，每 🌷 隔34天更换培养基 🐺 。
培养1014天，或直至 🦉 形成子宫内膜样克隆。
5. 克 🦋 隆分 🌹 离
用无菌 🌷 吸管 🌹 轻轻刮取子宫内膜样克 🐟 隆。
将 🌴 克隆转移到新的培养皿中，继续培养。
6. 分 🐕 化 🦅
将干细胞分化成子宫内膜细胞，可 🐼 通过激素处理或共培养等方法。
注意事项使 🐈 用无菌技术操作 🌼 。
胰 🐛 蛋白酶或胰凝乳蛋白酶不适用 🌹 于 🍁 小鼠子宫内膜干细胞的培养。
培养 🌻 基中激素的浓 🐯 度和类型会影响干细胞的增殖和分化。
定 🐵 期监测细胞活 🐵 力 🦅 和形态，及时更换培养基。
