外周血干 🐱 细胞如何分离（外 🍁 周血干细胞如何动员和采集）
- 作者: 刘茉一
- 来源: 投稿
- 2025-03-19
1、外周 🐎 血干细胞 🌿 如何分离
外周血干细胞分 💮 离步骤
外周血干细胞 (PBSC) 分离用于治疗各种血液和 🐯 免疫疾病分离。过程包括以下步骤：
1. 动 🌺 员 🦋
给予患者 Granulocyte Colony Stimulating Factor (GCSF) 或其他动员剂，以将干细胞从骨髓 🐒 释放到外周血中。
动员通常 🐱 持续 🐺 47 天。
2. 白 🌷 细胞 🐶 收集
使用细 🐱 胞 🐟 分离机收集外周血分离，红细胞血、小板和血浆。
白细胞 🦄 富 🍁 集部分 🐞 含有 PBSC。
3. 分 🦈 离 🐴
使用 🌸 密度梯度离 🪴 心分离白细胞富集部分 🐛 中的 PBSC。
PBSC 较轻，因此会漂 🌷 浮在 🌳 梯度溶液的顶部 🐎 。
4. 细 🐛 胞培养
分离 🐺 的 PBSC 可以培 🦢 养在细 🦁 胞培养基中以，扩大细胞数量。
培养 🌳 通常持续 12 天 🐵 。
5. 冷冻 🐶 保存 💮
PBSC 可以冷冻在液氮中以，供 🐛 日后移植。
分离方法分离 PBSC 的常 🕷 用方法包括 🐝 ：
磁性激活细胞分选 (MACS)：使用磁性珠子附着在干细 🌲 胞表 🌺 面，然后用磁场分离。
流式细胞术分选：使用荧光标记抗体识别和 🐘 分离特定表型的干细胞。
密度梯度 🌷 离心：利用细胞密 🌸 度的差异进 💮 行分离。
收集效率PBSC 收集效率取决于患者的健康状况、动员剂类型和分离方法 🌺 。一般来说，单次白细胞 🐋 收集可以产生 25 x 10^6 个集 CFUGM（落形成单位巨噬细胞）。
2、外周血干细胞 🦈 如何动员和采集
外 🌻 周血干细胞动员 🦈
外周血干细胞 🌵 动员是指刺激骨髓 🦅 中未成熟的干细胞释放到外周血中。这通常是通过以下方式实现的：
细胞因子动员：注射格拉斯替激素 (GCSF) 或粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 (GMCSF) 等细胞因子 🌼 ，以刺激干细胞释放。
化疗动员：使用化疗药物轻微损伤骨髓，导致干细胞释放到 ☘ 血液中。
外周血 🐝 干细胞采 💐 集 🐺
动员 🍀 后 🦟 ，干细胞可以通过以下方 🌺 法采集：
白细 🕸 胞分离术: 使用机器从外周血中分离出白细胞，其中包含干细胞。
持续性血细胞分离机采集：类似 🐕 于白细胞 🐋 分离术，但，设备 🐝 更先进可以连续数小时采集干细胞。
血小板分离术：特定情况下，可 🌻 以 🐦 从血小板分离术中收集干细胞。
外周 🌼 血干细 🌸 胞采集过程 🐞
1. 动员：通常通过皮下 🐘 注射细胞因子或进行化 🐶 疗动员。
2. 血细胞计数：定期 🐯 监测外周血白细胞计数，直至达到目标计数。
3. 集合：患者通过静脉输液接受白细胞分离术或血小板分 🐛 离术，以收集干细胞。
4. 冷冻 🐛 和储存：收集的干细胞冷冻并储存，以便将来 🦋 移植。
注意事项外周血干细胞动员可能会引起骨骼或肌肉疼痛、疲劳和其他副 🕷 作用。
为了获得 🐦 最佳结果，需要 🦈 在采集前进行适当的动员。
外 🐡 周血干细胞采集通常比骨髓移植 🌷 更快更简单，但收集的干细胞数量可能较少。
3、外周血干细 🐯 胞如何分离DNA
外周血干细胞 DNA 分 🌷 离 🐶 步 🐞 骤
材料：外 🪴 周血干细 🐧 胞样 🕊 本
抗 🐶 凝血剂（EDTA 或枸 ☘ 橼酸 🐋 钠）
细胞溶解液（TrisEDTA 缓冲液或商业 🐕 试剂 🌵 盒）
蛋 🐯 白 🐧 酶 🐘 K
异丙醇70% 乙 🐘 醇 🐺
TE 缓冲 🐵 液 🐕 缓 🦈 冲液（TrisEDTA ）
步骤：1. 采集 🐈 并 🕷 处理外周血干 🦄 细胞样品：
采集外周血样品并加入抗凝血剂 🕊 以 🐵 防止凝结。
分离外周血干细胞，通常使用密度梯度离心或磁珠纯化 🐱 方法。
2. 细 🌴 胞溶解和蛋白酶 🐎 K 消 🕸 化：
将分离出的外周血干细胞重悬在细胞溶解 🦋 液中，孵育分 30 钟以溶 🐵 解细胞。
加入蛋白酶 K 并孵育过夜，以消化细胞中的蛋白质 🌻 。
3. DNA 沉 🐕 淀：
加入异丙 🐧 醇室温孵育 30 分钟，使 DNA 沉淀。
离心收集 DNA 沉 🪴 淀。
4. 洗 🦉 涤 🐴 ：
用 70% 乙醇洗涤 DNA 沉淀，去除 🌷 杂 🌻 质。
离心并弃去洗涤 🐴 液 🐋 。
5. 重 🐺 悬和定量 🐋 ：
将 DNA 沉淀 ☘ 用 TE 缓冲液重 🐺 悬 🍀 。
用分光光度计测量 DNA 浓 🦅 度。
注意 🦆 事 🐅 项 🕸 ：
确 🐞 保所有材料和 🐡 试剂无核酸酶污 🕷 染。
准 🐠 确测量孵育 🐒 时间和温度。
完全去除异丙醇 ☘ 残留物，以 🐞 免影响后续步骤。
DNA 样品应 🐝 储存在 20°C 或更低 🐕 的温度下 🦢 。
4、外周血干细胞如何 🦄 分离出 🐡 来
外周血 🐺 干细胞分离步骤 🐺 ：
1. 动 🐧 员 🦅
注射动员剂（如粒 🐎 细胞集落 🐠 刺激因子，GCSF）以刺激骨 🐡 髓释放干细胞进入外周血。
动员 🐵 通常持 🌲 续 45 天。
2. 白细胞分 🐎 离
从外 🐋 周血中收集白 🐞 细胞 🌳 。
通常使用离心法或白细胞分离术（例如白细胞分离中心或白细胞分 🍀 离层）从全血中分离白细胞。
3. 干细胞 🐕 分离
使用以下方法之一从白细 🐵 胞中分离干细胞 🍀 ：
密 🐝 度梯度 🦅 离心法：根据细胞密度分离干细胞和免疫细胞。
磁性细胞分选：使用磁性珠与干细胞表面 🌸 标记物结合，然后使用磁场捕获干细胞。
流式细胞术：使用荧光标记抗体靶向 🦈 干细胞表面标 🐎 记物，然后使 🐵 用流式细胞仪对细胞进行分选。
4. 纯 🌼 化 🌿
分离后，干，细胞可能 🐺 会进一步纯化以减少污 🐦 染细胞例如：
CD34+ 纯化：使用靶向 CD34 标记 💐 物的抗 🐱 体和磁性珠。CD34 是。一种与造血干细胞相关的表面分子
细胞培养：在培养基中培养干细胞以去除含残留细胞 🦆 。
5. 收 🐡 集 💮 和储 🐘 存
分离和纯化后，干细胞被收集并在液体氮中储存以 🌷 备将来使用。
