原代干细胞贴壁培养（原代干细胞贴壁培养多少钱）
- 作者: 马洛祈
- 来源: 投稿
- 2025-01-03
1、原代干细胞贴壁培养
原代干细胞贴壁培养
原代干细胞是直接从组织中提取的未分化的细胞。贴壁培养是指将细胞附着在平坦的表面上生长。原代干细胞贴壁培养是干细胞研究和再生医学中的基本技术。
材料无血清培养基
贴壁培养皿或培养瓶
生物安全性柜
细胞刮刀或移液器
抗生素/抗真菌剂
步骤1. 组织解离：将组织切成小块，并使用酶或机械解离法进行解离。
2. 细胞悬液：将解离后的组织悬浮在无血清培养基中。
3. 过滤：将细胞悬液通过细胞过滤器过滤，去除组织碎片。
4. 离心：将细胞悬液在低速下（例如，1200 rpm，5 分钟）离心。
5. 去除上清液：小心地去除上清液，仅保留细胞沉淀。
6. 贴壁：将细胞悬浮在无血清培养基中，并将其滴加到贴壁培养皿或培养瓶中。培养皿的表面应涂有细胞外基质蛋白（例如，胶原蛋白或层粘连蛋白），以促进细胞贴壁。
7. 培养：将培养皿或培养瓶置于培养箱中（例如，37°C、5% CO2）。
8. 监测贴壁：定期监测细胞贴壁情况，并根据需要更换培养基。
注意事项无血清培养基对于防止细胞分化至关重要。
定期更换培养基以去除废物和补充营养物质。
避免使用抗生素/抗真菌剂，因为它们可能抑制干细胞增殖。
使用生物安全性柜以防止污染。
原代干细胞贴壁培养需要一定的技术技能和经验。
应用原代干细胞贴壁培养用于：
干细胞研究
再生医学
组织工程
药物测试
2、原代干细胞贴壁培养多少钱
原代干细胞贴壁培养的费用会根据以下因素而有所不同：
干细胞类型：不同的干细胞类型培养难度和所需试剂不同，导致成本差异。
培养基和试剂：培养所需的基质、生长因子和补充剂的质量和数量。
培养容器和设备：培养所需培养皿、培养基板、显微镜和污染控制措施。
规模：培养的细胞数量和所需的批次规模。
地点：不同地区人工和材料成本存在差异。
一般而言，原代干细胞贴壁培养的费用范围如下：
学术实验室：每批次 500 美元至 2,000 美元
商业服务：每批次 1,000 美元至 5,000 美元
特殊情况：
人类胚胎干细胞的培养可能更昂贵，费用在每批次 5,000 美元至 10,000 美元之间。
涉及复杂培养技术（如 3D 培养）的培养可能会产生更高的费用。
提示：向多家供应商索取报价以比较价格。
考虑批量订购以降低单位成本。
寻找提供折扣或学术定价的供应商。
3、原代干细胞贴壁培养方法
原代干细胞贴壁培养方法
材料：原代干细胞悬液
无血清培养基
含血清培养基
贴壁培养皿
胰蛋白酶EDTA 溶液
移液枪和枪头
培养箱 (37°C，5% CO2)
步骤：1. 制备贴壁培养皿：用含血清培养基预涂贴壁培养皿，放置过夜。
2. 接种原代干细胞：吸出预涂贴壁培养皿中的培养基，加入原代干细胞悬液。细胞密度应根据细胞类型而定，通常为 25 x 10^4 个细胞/cm^2。
3. 培养：将培养皿放置于 37°C、5% CO2 的培养箱中。培养时间根据细胞类型而异，通常为 23 天。
4. 更换培养基：隔天更换一次培养基，使用无血清培养基。
5. 贴壁：随着细胞增殖，它们将贴附在培养皿表面。通常在 23 天后，大多数细胞都会贴壁。
6. 传代：当细胞达到 8090% 的汇合度时，需要传代培养。吸出培养基，加入胰蛋白酶EDTA 溶液，消化细胞 25 分钟。随后，用含血清培养基终止消化并小心地混匀。将细胞悬液转移到新的预涂贴壁培养皿中，并加入新鲜的培养基。
注意事项：
不同的原代干细胞类型可能需要不同的培养条件。
尽量使用无菌技术，以防止细胞污染。
定期监测细胞生长，并根据需要更换培养基。
传代时，应将细胞分成较小的分量，以避免过密培养。
为了获得更高质量的细胞，建议在多次传代后使用经过免疫磁珠或 FACS 分选的细胞。
4、原代肝细胞培养贴壁
原代肝细胞培养贴壁
材料：原代肝细胞悬浮液
完全培养基（含 10% FBS）
胶原包被的培养皿或培养板
细胞培养箱（37°C，5% CO2）
步骤：1. 制备胶原包被的培养皿：在培养皿或培养板中涂抹一层胶原溶液，并孵育 30 分钟以上，使胶原固化为一层薄膜。
2. 接种细胞：将原代肝细胞悬浮液接种到胶原包被的培养皿中，以所需密度（通常为 5 x 10^4 至 1 x 10^5 细胞/cm2）。
3. 孵育细胞：将细胞放在培养箱中，于 37°C、5% CO2 条件下孵育。
4. 更换培养基：每隔 23 天更换培养基，去除非贴壁细胞和细胞碎片。
5. 检查细胞贴壁情况：定期使用显微镜观察细胞贴壁情况。贴壁良好的细胞呈多边形或铺路石状，牢固地附着在培养皿表面。
注意事项：
胶原包被的培养皿有助于肝细胞贴壁，但不完全保证。
孵育期间避免振动或操作培养皿。
保持培养基无菌，避免细胞污染。
如果细胞贴壁不良，可以尝试调整接种密度、孵育时间或培养基成分。
