毛囊干细胞如何分离培养（毛囊干细胞如何分离培养的）
- 作者: 胡嘉倪
- 来源: 投稿
- 2025-01-04
1、毛囊干细胞如何分离培养
毛囊干细胞分离培养
一、组织采集
从健康个体或动物的头部或躯干区域采集脱落期毛囊。
用消毒溶液清洁毛囊，去除表皮和皮下脂肪组织。
二、消化和分离
将毛囊置于含有胶原酶和透明质酸酶的消化液中。
孵育数小时至一夜，使毛囊组织分解。
通过离心去除消化液，收集细胞悬液。
利用免疫磁珠或荧光激活分选对细胞悬液进行免疫表型分析，分离出阳性毛囊干细胞亚群。
三、培养培养基:
毛囊干细胞通常在富含生长因子的培养基中培养，如克隆培养基 (CKM) 或 Ham's F12 培养基。
培养条件:
培养在 37°C、5% CO2 的潮湿环境中。
每 35 天更换一次培养基。
培养基补充:
生长因子，如 EGF、bFGF、PDGF
抗生素抗真菌剂
四、细胞特征
形态: 毛囊干细胞呈纺锤形或星形，具有高度分化的细胞核和丰富的细胞质。
表面标志: 表达 MSCA1、CD34、CD73、CD90、CD105 等干细胞标志物。
多能性: 具有分化为多种细胞类型的潜能，包括毛囊细胞、表皮细胞和脂肪细胞。
五、应用再生医学: 用于治疗脱发、烧伤和慢性伤口。
药物筛选: 评估候选药物对毛囊生长的影响。
基础研究: 研究毛囊发育和再生机制。
2、毛囊干细胞如何分离培养的
毛囊干细胞的分离培养
1. 样品采集
从供体头皮获得毛囊样本（通常通过剃毛术或手术切除获得）。
2. 毛囊解剖
使用显微镜和精细手术工具，将毛囊从周围组织中分离出来。
小心不要损坏毛囊或其干细胞。
3. 消化
将毛囊样品置于含有消化酶（如胶原酶）的溶液中。
消化过程将毛囊的结构分解为单个细胞。
4. 细胞分离
将消化后的细胞悬浮液过滤通过细胞滤器，以除去细胞碎片和残留组织。
使用免疫磁珠或流式细胞仪对毛囊干细胞进行标记和分离。
5. 培养
将分离出的毛囊干细胞悬浮在富含生长因子的培养基中。
通常使用含表皮生长因子 (EGF) 和成纤维细胞生长因子 (FGF) 的培养基。
培养物被放置在潮湿的孵箱中，在 37°C 和 5% CO2 的环境中培养。
6. 细胞增殖和分化
毛囊干细胞在培养基中增殖并分化为毛囊所需的各种细胞类型。
这些细胞类型包括角质形成细胞、毛囊黑色素细胞和内毛根鞘细胞。
7. 培养物维护
毛囊干细胞培养物需要定期传代，以保持它们的生长和分化能力。
传代过程包括将细胞从原培养物中分离出来、重新悬浮在新鲜培养基中并重新接种到培养皿中。
3、毛囊干细胞如何分离培养基
毛囊干细胞分离培养方法
材料：人或动物毛囊样本
Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)
胶原酶 IV
弹性蛋白酶
胰蛋白酶
胎牛血清 (FBS)
上皮细胞生长因子 (EGF)
成纤维细胞生长因子 (FGF)
程序：1. 分离毛囊：
从供体头皮或其他毛发部位收集毛囊。
用无菌 PBS 冲洗毛囊。
2. 消化毛囊：
将毛囊转移到含胶原酶 IV、弹性蛋白酶和胰蛋白酶的消化溶液中。
在 37°C 下孵育约 60 分钟。
3. 过滤和离心：
将消化后的溶液通过 70 微米细胞筛过滤器过滤。
将悬液在 300×g 下离心 10 分钟。
4. 收集细胞：
去除上清液。
用 DMEM 洗涤细胞团，并再次在 300×g 下离心 10 分钟。
5. 计数和活力评估：
用台盼蓝排除法计数细胞。
用流式细胞仪评估细胞活力。
6. 培养：
将细胞悬液接种到 DMEM 中，添加 10% FBS、EGF 和 FGF。
在 37°C、5% CO2 下培养细胞。
培养基：DMEM 培养基通常用于培养毛囊干细胞，其中添加了以下成分：
10% 胎牛血清（FBS）
10 ng/ml 表皮生长因子（EGF）
10 ng/ml 成纤维细胞生长因子（FGF）
培养基应每 23 天更换一次，以维持细胞生长。
