骨髓间质干细胞冻存（骨髓间充质干细胞培养基）
- 作者: 郭黎初
- 来源: 投稿
- 2025-01-01
1、骨髓间质干细胞冻存
骨髓间质干细胞冻存
骨髓间质干细胞（BMSCs）是多能干细胞，存在于骨髓基质中。它们具有分化为多种细胞类型的潜力，包括成骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞。BMSCs 广泛用于再生医学研究和治疗中。
冻存是长期保存 BMSCs 活力和功能的关键技术。通过冻存，BMSCs 可以被保存在超低温下，同时保持其分化和增殖潜力。
方法BMSCs 冻存通常涉及以下步骤：
1. 细胞分离： 从骨髓样本中分离 BMSCs，通常使用密度梯度离心法。
2. 细胞计数： 确定细胞浓度，以确定冷冻溶液的体积。
3. 制备冷冻溶液： BMSCs 与含二甲基亚砜 (DMSO) 等冷冻保护剂的培养基混合。
4. 分装： 将细胞悬液分装到冷冻管中。
5. 缓慢冷冻： 使用可编程冷冻器将冷冻管缓慢冷冻至80°C。这有助于防止细胞内冰晶形成。
6. 液氮保存： 将冷冻管转移到液氮罐中，液氮温度为196°C。
复苏复苏冻存的 BMSCs 涉及以下步骤：
1. 快速解冻： 将冷冻管从液氮中取出，在 37°C 的水浴中快速解冻。
2. 清洗： 用培养基清洗细胞以去除剩余的冷冻保护剂。
3. 离心： 离心细胞以去除细胞碎片。
4. 培养： 将细胞接种到适当的培养基中并培养。
注意事项冷冻保护剂选择： DMSO 是最常用的冷冻保护剂，但其他冷冻保护剂也可用于保护 BMSCs。
冷冻速率： 缓慢冷冻对于防止冰晶形成至关重要。
细胞密度： 冷冻溶液中的细胞密度影响复苏率。
复苏技术： 快速解冻和仔细清洗对于成功复苏至关重要。
应用冻存的 BMSCs 已广泛用于各种应用中，包括：
骨和软骨再生
神经再生
心血管疾病治疗
免疫调节
2、骨髓间充质干细胞培养基
骨髓间充质干细胞培养基
成分：Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) 或 αMEM
胎牛血清（FBS），1020%
抗生素，如青霉素链霉素或氨基青霉素青霉素
L谷氨酰胺
非必需氨基酸
可选添加剂：
白蛋白因子（如人血清白蛋白）
VEGF 和 bFGF 等生长因子
β甘油磷酸盐和抗坏血酸酸等成骨诱导剂
膳食补充剂，如转铁蛋白和胰岛素
优化培养条件：
培养温度： 37°C
CO2浓度： 5%
培养基更换频率： 每 23 天
细胞密度： 5,00020,000 个细胞/cm2
使用说明：
1. 将骨髓间充质干细胞接种到培养皿或培养瓶中。
2. 添加新鲜的培养基，覆盖细胞。
3. 将细胞置于优化培养条件下。
4. 每隔 23 天更换培养基并监测细胞生长。
注意事项：
FBS 会抑制细胞分化，因此在诱导分化前应减少 FBS 浓度。
生长因子会促进细胞增殖和分化，但应根据特定实验目的进行优化。
骨髓间充质干细胞培养基应无支原体和内毒素。
3、骨髓间质干细胞是一种
多能干细胞
4、骨髓间充质干细胞提取
骨髓间充质干细胞提取步骤
骨髓间充质干细胞 (MSC) 提取通常涉及以下步骤：
1. 骨髓采集：
从捐献者的髂骨（髋骨）中穿刺提取骨髓。
使用针筒抽取少量的骨髓，通常为 50100 mL。
2. 单核细胞分离：
骨髓样本用 Ficoll 梯度离心进行分离，以分离单核细胞，其中含有 MSC。
单核细胞是 MSC 的前体细胞。
3. 培养：
分离后的单核细胞接种到含有特定培养基的培养皿或培养瓶中，以促进 MSC 的生长和增殖。
培养基通常含有生长因子和血清。
4. 贴壁培养：
MSC 会贴附在培养皿或培养瓶的表面。
游离细胞（非 MSC）会被去除。
5. 扩增：
培养皿或培养瓶内的 MSC 会增殖形成细胞群体。
定期更换培养基以提供营养并去除废物。
6. 收获：
当 MSC 达到所需的数量和纯度时，它们就可以从培养容器中收获。
通常使用胰蛋白酶酶解细胞，然后通过离心收集细胞。
7. 冷冻保存（可选）：
收获的 MSC 可以冷冻保存以备将来使用。
将 MSC 悬浮在含有保护剂的培养基中，然后在 80°C 或更低的温度下冷冻。
注意事项：
整个提取过程应在无菌条件下进行，以防止污染。
不同实验室使用的具体提取方法和培养条件可能有所不同。
提取的 MSC 应进行适当的表征，以确认其纯度和多能性。
