小鼠肌腱干细胞提取（小鼠肌腱干细胞提取方法）
- 作者: 王梨珂
- 来源: 投稿
- 2024-12-31
1、小鼠肌腱干细胞提取
小鼠肌腱干细胞提取
材料：小鼠尾巴
灭菌手术器械和缝合材料
无血清培养基（例如DMEM/F12）
0.25% 胰蛋白酶/EDTA 溶液
抗生素（例如青霉素、链霉素）
培养瓶或培养板
细胞培养箱（37°C，5% CO2）
步骤：1. 手术准备：
麻醉小鼠。
剃除小鼠尾巴末端的毛发。
无菌擦拭手术区域。
2. 提取肌腱：
在尾巴末端做一个小切口。
用无菌镊子抓住肌腱并将它们小心地拉出。
切断多余的组织和肌肉。
3. 酶消化：
将肌腱切成小块并放入含 0.25% 胰蛋白酶/EDTA 溶液的离心管中。
在 37°C 下孵育 12 小时，偶尔涡旋混合。
4. 中和消化液：
加入两倍体积的无血清培养基以中和胰蛋白酶。
离心 5 分钟，4°C，1200 × g。
5. 细胞分离：
小心吸出上清液，加入新的无血清培养基洗涤细胞。
离心并重复洗涤步骤。
将细胞重悬于含有抗生素的培养基中。
6. 培养：
将细胞接种到培养瓶或培养板中。
将培养皿置于 37°C，5% CO2 培养箱中。
在细胞附着后更换培养基。
细胞鉴定：
可通过免疫表型分析或多潜能分化试验来鉴定小鼠肌腱干细胞。常见的标记包括 CD44、CD90 和 Sca1。
提示：精确解剖和小心处理至关重要，以获得良好的细胞产量。
在无菌条件下操作以避免污染。
优化酶消化条件以获得最佳的细胞释放。
经常监测细胞并及时更换培养基以维持细胞健康。
2、小鼠肌腱干细胞提取方法
小鼠肌腱干细胞提取方法
材料:小鼠模型
无菌仪器
无菌培养基和溶液
荧光激活细胞分选 (FACS) 仪器（可选）
步骤:1. 小鼠麻醉和安乐死
给小鼠注射适量的麻醉剂，并确认其麻醉有效。
根据相关指南对小鼠进行人道安乐死。
2. 组织采集
使用无菌技术从小鼠身上提取肌腱组织，例如跟腱或屈腱。
将组织小心地放入无菌培养基中。
3. 酶消化
使用 0.2% 胶原酶 II 或 IV 溶液在 37°C 水浴中消化组织 2 小时。
定期轻轻摇晃试管。
4. 离心
将消化后的悬浮液在 1500 rpm 离心 5 分钟，除去未消化的组织碎片。
收集上清液。
5. 细胞分离
使用 FACS 仪器（可选）根据荧光抗体标记来分离肌腱干细胞。
也可以通过培养和筛选法来分离细胞。
6. 培养
将分离的肌腱干细胞培养在富含血清的培养基中，例如 Dulbecco's Modified Eagle's Medium（DMEM）或 αMEM。
添加抗生素以防止细菌污染。
7. 鉴定
使用免疫组化或流式细胞术对细胞进行鉴定。
常见的肌腱干细胞标志物包括 CD34、CD44 和 CD90。
提示:使用无菌技术至关重要，以防止污染。
优化酶消化时间和条件可以最大程度地提高细胞产量。
根据具体实验目的，可能需要额外的培养和分化步骤。
请遵守所有相关的动物实验伦理准则。
3、小鼠肌腱干细胞提取原理
小鼠肌腱干细胞提取原理
肌腱干细胞 (TSCs) 是存在于肌腱组织中的多能干细胞。以下步骤了小鼠肌腱干细胞的提取原理：
1. 肌腱组织获取：
从小鼠牺牲后收获肌腱组织，例如尾肌腱。
移除非肌腱组织（例如肌肉和脂肪）。
2. 酶解：
将肌腱组织切碎成小块。
用胶原酶和解离酶（例如胰蛋白酶）处理组织，以消化细胞外基质并释放细胞。
3. 细胞分离：
酶解后的细胞悬液通过过滤或离心除去碎片和细胞碎片。
使用抗体或磁珠分选系统进行细胞分选，以分离表达 TSC 特异性标志物的细胞（例如 Scx、CD90 和 CD105）。
4. 细胞培养：
分离的 TSC 接种到含生长因子和营养成分的培养基中。
细胞在合适的培养条件下培养，例如 37°C、5% CO2 和含血清的培养基。
5. TSC 特性鉴定：
一旦 TSC 生长到足够的数量，就可以进行特性鉴定。
检测 TSC 标志物表达，例如 Scx、CD90 和 CD105。
评估 TSC 的分化潜能，例如向肌腱样细胞或脂肪细胞分化。
6. 应用：
分离和鉴定的 TSC 可用于各种应用，例如：
肌腱损伤的研究和治疗
组织工程和再生
衰老和疾病的研究
4、小鼠神经干细胞提取方法
小鼠神经干细胞提取方法
材料：小鼠仔（13 日龄）
无菌器械（解剖镊、剪刀）
冷 PBS
含胰蛋白酶和 DNA 酶的解离液（如，0.25% 胰蛋白酶、0.1% DNA 酶）
离心机细胞培养基（如 DMEM/F12，含 10% FBS 和 1% 抗生素）
培养皿或培养瓶
步骤：1. 准备小鼠：
对小鼠进行消毒，并放在无菌环境中。
2. 去除脑部组织：
用无菌镊子小心地去除小鼠的头皮。
用剪刀沿着中线剪开颅骨，小心不要损伤大脑组织。
用无菌镊子去除大脑组织。
3. 解离脑组织：
将大脑组织转移到装有冷 PBS 的培养皿中。
轻柔地切碎大脑组织成小块。
将大脑组织块转移到装有解离液的离心管中。
在 37°C 孵育 15 分钟，每 5 分钟轻柔地混匀一次。
4. 抑制解离反应：
加入等体积的细胞培养基中止解离反应。
以 1000 rpm 离心 5 分钟。
5. 去除髓鞘：
去除上清液。
加入髓鞘去除液（如，预先标记的抗髓鞘磁珠），并孵育 15 分钟。
以 1000 rpm 离心 5 分钟。
用细胞培养基重悬沉淀。
6. 分离神经干细胞：
使用神经干细胞表面标记物（如，CD133、Nestin）进行 FACS 分选或免疫磁珠分离。
7. 培养神经干细胞：
将分离出的神经干细胞接种在预先包被好的培养皿或培养瓶中。
使用含有神经营养因子的培养基培养。
注意事项：
所有操作均应在无菌条件下进行。
使用新鲜的小鼠仔。
避免过度解离，以免损伤神经干细胞。
确保培养皿或培养瓶已包被多聚赖氨酸或层粘连蛋白。
