获得小鼠胚胎干细胞（小鼠胚胎干细胞经定向诱导可获得多种功能细胞）
- 作者: 郭黎初
- 来源: 投稿
- 2024-12-14
1、获得小鼠胚胎干细胞
通过卵泡流式细胞术从 3.5 天囊胚中获取小鼠胚胎干细胞 (ESC)
材料：3.5 天囊胚
Tyrode's 透射液（T2）
0.5% 小牛血清白蛋白（BSA）在 T2 中（BSAT2）
酪氨酸酶抑制剂 10 mM（TI）在 BSAT2 中
胶原酶 IV（200 U/mL）在 BSAT2 中
胰蛋白酶（1 mg/mL）在 BSAT2 中
KnockOut 血清（KSR）培养基（含 10% 小牛血清）
0.1% 聚乙二醇 (PEG) 8000
程序：1. 收集囊胚：从 3.5 天怀孕的母鼠中取出子宫，并用 T2 冲洗。
2. 除去透明带：将囊胚转移到含 TI 的 BSAT2 中 1015 分钟，以松解透明带。
3. 解聚集囊胚：在酶混合物（胶原酶 IV 和胰蛋白酶）中孵育 1015 分钟，以解聚集囊胚。
4. 收集胚胎干细胞：用 BSAT2 洗涤并离心细胞。用含 KSR 培养基重悬细胞。
5. 去除细胞碎片：用 0.1% PEG 8000 溶液处理细胞 5 分钟，以去除细胞碎片。
6. 流式细胞术分选：使用特异性表面标记物（如 SSEA1）??，通过流式细胞术分选 ESC。
注释：程序应在无菌条件下进行。
孵育时间可能因酶活性而异。
可以通过使用不同的表面标记物分选具有特定分化潜力的子群 ESC。
2、小鼠胚胎干细胞经定向诱导可获得多种功能细胞
小鼠胚胎干细胞经定向诱导可获得多种功能细胞
胚胎干细胞 (ESC) 具有自我更新和分化为所有细胞类型（三胚层）的潜能，在再生医学和药物开发领域具有巨大潜力。定向诱导 (DI) 是将干细胞转化为特定功能细胞类型的过程，为疾病建模、药物筛选和细胞移植提供了宝贵的工具。
小鼠胚胎干细胞的定向诱导
小鼠 ESC 已被广泛用于 DI 研究，因为它们易于操作和具有高度的遗传可操作性。DI 协议通常涉及暴露 ESC 于特定组合的生长因子、胞外基质和微小RNA，这些组合促使细胞向目标谱系分化。
获得的功能细胞类型
通过 DI，小鼠 ESC 已被成功诱导分化为广泛的功能细胞类型，包括：
神经元：用于神经系统疾病的研究和再生
心肌细胞：用于心血管疾病的建模和治疗
肝细胞：用于肝病的研究和细胞移植
骨髓细胞：用于免疫学研究和造血系统疾病的治疗
内分泌细胞：用于糖尿病和内分泌失调的研究和治疗
机制DI 机制涉及表观遗传修饰、转录因子激活和信号传导途径。生长因子和胞外基质提供信号，激活特定的转录因子，从而改变 ESC 的基因表达模式，使其能够分化为目标细胞类型。
应用DI 技术在以下方面具有广泛的应用：
疾病建模：通过将 ESC 诱导为疾病特异性细胞，研究人员可以深入了解疾病机制和开发治疗策略。
药物筛选：功能细胞可用于筛选候选药物的功效和毒性。
细胞移植：诱导的细胞可用于修复损伤或退化的组织，例如神经和心血管组织。
结论小鼠胚胎干细胞定向诱导是一种强大的技术，可获得多种功能细胞类型。通过操纵生长因子、胞外基质和基因调节，研究人员可以利用这种技术创建疾病模型、筛选药物并开发用于治疗各种疾病的细胞移植策略。
3、小鼠胚胎干细胞最早于1981年获得
错误。小鼠胚胎干细胞最早于 1998 年，而不是 1981 年获得。
