小鼠 🐧 造血干细胞分选（小鼠骨髓造血干细胞染色体的制备和观察）
- 作者: 马艺澄
- 来源: 投稿
- 2025-03-17
1、小鼠造血 🐈 干细胞分选
小 🌷 鼠造血干细胞 💐 分 🦊 选
背景：造血干 🐴 细胞 (HSCs) 是骨髓中的罕见细胞，具有自我更新和分化成所有血细胞系的能力。小鼠分 HSC 选 HSC 对于研究生物学干细胞、移。植和治疗 🦄 骨髓衰竭至 🌺 关重要
方法：存在 🐦 多种分选小鼠 HSC 的方法，包括：
荧光激活细胞分选 (FACS)：使用特定抗体结合 HSC 表面标记 🌳 ，然 💐 后使用流式 🐕 细胞仪分选细胞。
磁性细胞 🐝 分选 (MACS)：使用包被有抗体的磁性 🌻 珠 🦅 子与 HSC 结合，然后使用磁性柱分选细胞。
贴壁富集：HSC 倾向于贴壁，而其他细胞则不贴壁。通，过培养细胞并去除非贴壁细胞可以富 ☘ 集 HSC。
细胞分选：使用显微镜 🌹 手动 🐞 分选 HSC。
常见表面标 🐒 记 🐝 ：
用于小鼠 🌹 HSC 分选的常见表面标记包括：
Sca1
cKit
Lin (淋巴细胞、巨、噬细胞粒 🐎 细胞和红细胞的表面标记 🌸 )
CD34
分 🐡 选 🌷 策 🐡 略：
通常使用以下分选策略分 🐋 选小 🦅 鼠 HSC：
LinSca1+cKit+ (LSK) 细胞：富含 🪴 HSC 的 🐱 群组
LSK CD34 细胞：更纯化的 HSC 群组 💮
应用：小 🌻 鼠 HSC 分选用于：
研究 HSC 生物 🐱 学 🦆 和 🐧 分化
进行 🐈 骨 💮 髓移植 🐶
开 🦁 发治疗骨 🦉 髓衰竭的新疗法 🐟
研究疾病和治 🐝 疗中的 🐘 HSC 调节
注 🕊 意 🌼 事项：
HSC 分选 🌾 会影响细胞活 🐠 力和功 🍀 能。
不同的分选方法具 🐬 有不同的优点和缺点。
重要的是要优化分选 🌷 方法以最 🦟 大程度地获得纯 🌴 化和功能性 HSC。
2、小鼠骨髓造血干细胞染色体 🐛 的制备和观察
小 🐅 鼠骨髓造血干细胞染色体的制备和观察
材 🐳 料和 🌼 设备 🦟 ：
小鼠无菌 🐞 操作 🌷 台
无菌耗材（培养皿 🍀 、移液 🌻 管）
无血清培 🌷 养 🪴 基
染色剂（显带剂、荧光染 🕷 料）
载玻片盖玻片
显微镜
步骤：
1. 小 🕸 鼠 🍀 采 🐼 髓
给 🕊 予 🦈 小鼠全身麻 🐕 醉。
固定小鼠，露 🐠 出股骨。
用无菌 🦆 注射器和针 🍀 头穿刺股骨，抽取 🐼 骨 12ml 髓。
2. 造 🌹 血干细胞分离 🕊
将骨髓移至无血清培养基中，加入分离液（如淋巴 🦟 细胞分离 🐶 液）。
离 🐬 心收集造血干细 🦄 胞 🐎 。
3. 染 🦍 色体 🦍 制备
将造血干 🐋 细胞转移至培养 🐛 皿中，加入显带剂。
孵育 💮 过 🐶 夜，中 🌼 断细胞分裂。
离心收集 🌳 细胞 🐘 。
用低渗液处理细 🐴 胞 💮 ，使其肿胀。
加入固定液 🐬 固定 🌷 细胞。
将细胞悬浮滴加至载 🌺 玻片上。
4. 染色 💮 体 🪴 观察 🦍
将 🦢 盖玻片置于载玻片上，挤出多余的悬浮液。
去除盖玻片，用荧光染 🌹 料染 🌴 色染色体。
使用显 🐕 微镜观察染色体。
结果：显微镜下观察到的染色体将显示清晰 🌹 的条带，代表不同染色体的不同区域。通，过观察条带，模式可以鉴定染色体的数目和结构异常如染色体易位、缺。失或增加
注意 🕷 事项 🐎 ：
所有操作应在无菌条件 🌹 下进行，以防止污染。
使用高品质的显带剂 🐼 和 🦊 荧光染料，以获得最佳的染色效果。
观察染色体 🦅 的过程中需要经 🐯 验和准确性。
染色体异 💐 常的鉴定应由专业人员进行。
3、小 🐯 鼠骨髓造血干细胞形成各种血细胞
正确骨髓造血干细胞 (HSC) 是多能干细胞 🕷 ，它，们可以在骨髓中分化成 ☘ 各种血细胞包括：
红细 🦟 胞 🐕 （携 🐱 氧）
白细 🐟 胞（免疫 🦟 ）
血 🌳 小 🐱 板（止血 🕊 ）
4、小鼠和人 🐯 的造血干细胞都具有的表
小鼠和人 🦢 的造血干细胞都具有的表：
CD34：一个跨膜糖蛋白，是造血干细胞的经典标记 🦉 。
CD38：一个 🐬 胞外酶，在造血 🦢 干细胞上表达 🐒 较低。
CD90：一 🪴 种 🐳 糖蛋白，在造血干细胞上表 🦁 达较低。
CD45：一种跨膜蛋白酪氨酸磷酸酶，在造 🐧 血干细胞上表达较高。
CD117：一个酪 🐶 氨 🌵 酸激酶受体，在造血干细胞上 🐵 表达较高。
CD133：一个跨膜糖蛋白，在造血干细胞上表达较 🍁 高。
THY1：一个同 🐴 二聚体糖 🌻 蛋白，在 🦢 ，小鼠造血干细胞上表达在人造血干细胞上表达较低。
Sca1：一个小鼠淀粉结合蛋白，其抗原 🐴 在人造血干细胞上不存在。
