小鼠 🐅 干细胞提取 🌷 培养步骤（2iLIF培养液培养小鼠干细胞）

1、小鼠干 🐳 细胞提取培养步骤

小鼠干细胞提取培 🐯 养步 🐼 骤

C57BL/6 小 💮 鼠 🐒

PBS 缓 🐛 冲液 🌸

含 🌷 10% 胎牛血 🌵 清 🐱 (FBS) 的 Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM)

干细胞培养基基：于 DMEM，含有 15% FBS、1% 抗生素抗真菌剂、β巯基、乙醇 🌾 白介素6 (IL6)、SCF 因子因子、LIF

细胞 🦊 培养板 🌾 和 🌵 培养皿

移液管和枪 🐞 头

1. 小 🐳 鼠处死 🐱

根据机构指南处 🌴 死 🌿 小鼠。

消毒小 🐯 鼠腹部 🐠 区域 🌷 。

2. 小 🐧 鼠 🐋 骨髓 🐘 收集

手术取出小鼠股 🌻 骨和胫骨。

用 PBS 缓冲液冲洗骨头腔去 🍀 除骨髓细 🦋 胞 🕊 。

过滤骨髓细胞悬液以去除任 🦆 何骨碎片。

3. 红 🐴 细胞裂解（可 🦢 选）

如 ☘ 果需要去除红细胞，将骨髓细胞悬液与红细胞裂解缓冲液孵育。

离心 🌹 移 🐛 除红细胞 🐘 ，保留细胞沉淀。

4. 细胞计数 🌹 和接 🐯 种 🐠

计数细胞并将细胞悬液接 🦢 种到预先涂有干细胞培 🦍 养基的细胞培 🐺 养板上。

初始 🐠 接 🐱 种密度约为 🌴 每平方厘米 10,00020,000 个细胞。

5. 培养 🐋 和监 🦋 测

将培 🐴 养 🐞 板置于 🐎 37°C、5% CO2 孵箱中。

每 23 天 🌳 更换培 🐈 养基。

用显微镜 🌷 监测干 🦈 细胞贴 🦄 壁、生长和形态。

6. 传 🦆 代 🌾

当细 🐯 胞达 🌴 到 8090% 汇合 🌸 度时，进行传代。

用胰蛋白酶或胰凝乳蛋白酶 🐞 处理细胞脱 🦟 粘。

分 🦉 离 🌵 细胞，重 🐝 新接种到新的培养板上。

定期监 🕸 测细 🐡 胞形态和生长情况 🐵 。

保持无菌条件，防 🐞 止污染。

避免过度传代，因为这 🐴 可能会 🦄 导致细胞特性改 💐 变。

根据 🦉 需要调整培养基成 🐝 分以优化干细胞生长。

2、2iLIF培养液培养小鼠干 🐠 细胞

2iLIF培养液培养小鼠干 🐎 细 🌸 胞 🦊

2iLIF培养液是一种无血清培养基，用于培养多能小鼠干细胞。它 🌵 包含两个小分子抑制剂PD和CHIR99021，以及白细胞介素6 (LIF)。

基础培养 🐺 基 🐟 （DMEM/F12）

15% 胎牛血清 🍀 （FBS）或小牛血清（CS）

2i抑 🦁 制 🐳 剂 🦅 ：

PD (MEK抑制 🕊 剂)

CHIR99021 (GSK3抑制 🦆 剂)

β巯 🐯 基 🐱 乙醇 🐎

无血清： 消除了血清批次变 🌳 异性和污染风险。

生理相关性： 2i抑制剂模 🐅 拟了胚胎发育早期发生 🕸 的信号通路。

高增 🐱 殖率和自我更新 🌸 能力： 培养基提供了最佳 🌿 条件，以维持干细胞的增殖和多能性。

1. 将小鼠干细胞接种到预涂有吉拉丁的培 🐠 养皿中。

2. 在37°C、5% CO2的环境下培 🦆 养。

3. 每23天换 🐛 一 🦋 次 🍀 培养液。

使用高 🦅 质量的抑制剂和LIF。

定期监测干细胞的形态 🐅 和标记物 🦈 表达。

培养时间不应超 🐒 过20次 🦄 传 🐯 代。

2iLIF培 🌷 养 🕊 液已广泛用于研究小鼠干细胞的生物学，包括：

多 🐶 能性 🌺 维持

疾 🐦 病 🐬 建 🌵 模

再生医学 🐡

通过使用2iLIF培养液 🌷 ，研，究人员可以有效地培养和表征小鼠干细胞这为基础和转化研究提供了宝贵的工具。

3、干细胞培养和微生 🌴 物提取的区别

干细胞培养和 🪴 微生物 🐯 提取的 🌹 区别

干细胞培养：在受控条件下，使干细胞增殖和分化成特 🪴 定细胞类型的过程。这。些干细胞可以来自胚胎或成人组织

微生物提取 🐶 ：从自然环境 🐬 或宿主中分离和鉴定微生物的过程。这些微生物可用于研究、工。业应用或 🐛 生物技术

干细胞：胚胎、脐、带、血骨髓脂肪组 🐈 织

微生物 🐎 ：土 🐡 壤、水、食物、人 🕷 体

干细胞：生成特定细胞类型以用于再生 🌲 医学细胞、疗 🍀 法和药物测试。

微 🦢 生物：鉴定、表征和 🌺 利用微生物及其代谢物用 💐 ，于生物、制品药物发现和工业应用。

干 🐕 细胞：无菌技术 🐴 、组、织培养基生长因子和细胞分选

微生物：采集、富集、分离（基、于形 🦢 态生化特征或分子标记）、鉴（定）通过显微 🦈 镜或分子技术

干细 🐅 胞 🦍 ：通常是小规模操作，用于研究和 🌸 临床应用。

微生物：规模可从实验室 🐡 到工业 🐱 规模，用于生产生物制品 🦈 或开发生物技术产品。

干细胞：再 🦆 生医学、组、织、工 🦄 程细胞疗法药物测试

微生物生 🦊 物：制药药物、发、现、工、业酶生产生物控制环境监测

干细胞：可再生，具有分化成多种 🐛 细胞类型的潜力。

微生物：具有多样性和独 🌲 特代谢能力，为生物 🐈 技术应用提供丰富来源。

干细胞：受控分化和保持细 🦊 胞身份的难度。

微生物：从复杂环境 🐵 中分离和鉴定所需 🌻 的大量技术。

4、骨髓提 🐬 取培养干细胞的技术

骨 🐡 髓提取培养干细胞的技术

骨髓提取培养干细胞的技术涉及从骨髓中提取 🌵 干细胞，并在体外培养以扩大其 🐋 数量干细胞。是。具有自我更新和分化为不同细胞类型的潜力的未分化细 🐋 胞

1. 骨 🐯 髓 🐛 采集 🌹

从供体的 💮 髋骨或胸骨中抽取骨髓。

使用穿刺针或骨髓活检针穿刺 🦈 骨骼。

抽 🐕 取 🐈 约 50100 毫升 🐺 骨髓。

2. 骨 🦁 髓处 🌼 理 🌻

骨 🦢 髓与抗凝剂混合，防止凝结。

去除血细胞和 🌺 残渣，分 🕷 离干细胞。

使用离心、密度梯度离心或磁珠分选等技术进行 🌺 分离。

3. 干细胞培 🐘 养

分 🐋 离出的干细胞接种到富含生长因子的 🐦 培养基中 🦊 。

生长因子刺 🦟 激干细胞增殖和分化。

培 🪴 养环境通常在 37°C、5% CO2 的条件下。

4. 细 🌿 胞扩增 🐠

干细胞在培养皿或 ☘ 生物 🐶 反应器中进行扩增。

细胞 🌸 通过分裂增加数量 💮 。

扩增过程可能需 🦅 要 🌲 数周到数 ☘ 月。

5. 质量 🌿 控 🕊 制 🌷

培养的干细胞定期进行质量控制检 🌷 测，以确 🍁 保纯度、活力和分化潜能。

检测包括流式细胞术、免疫 🕸 组织化学和功能 🕷 测定。

骨髓提 🐴 取培养干细胞的技术 🌺 用于各种应用，包括：

再 🌴 生医学 🌻 ：用于治疗神经系统疾病、心、脏病骨骼疾病等。

细 🌾 胞移植移植：给患者，以恢复受损 🐟 或疾病组 🦊 织的功能。

药物开发：用于筛选 🌵 新药和 🦟 毒 🌿 性测试。

基础研究：了 🐶 解干细胞生物学和分化机 🌸 制。

骨髓 🐅 含 🌷 有丰富的干细胞来源。

培 🦅 养 🐬 过程相对简单 🐕 。

培养的干细胞具有分化成多 🌷 种细 🦍 胞类型的潜能。

骨髓采集 🌹 可能引起 🐺 疼痛和 🦊 不适。

培养 🌻 过程需要时间和资 🌻 源。

培养的干细胞的稳定性和分化潜能可 🐅 能 🦍 因培养条件 ☘ 而异。